Роль шаперона Hsp70 в реакции опухолевых клеток с повышенной экспрессией протоонкогена Мус на действие противоопухолевых препаратов

• Автор: Комарова, Елена Юрьевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 102 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ.

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Апоптоз
2.1.1. Основные морфологические черты апоптоза
2.1.2. Биохимические механизмы апоптотической гибели
2.1.3. Активация и регуляция каспазного каскада
2.2 Участие онкобелка Мус в регуляции апоптоза
2.3. Защитные системы опухолевых клеток
2.4. Белки теплового шока
2.4.1. Белки теплового шока и их классификация
2.4.2. Семейство белков Нвр70 и его функции
2.4.3. Роль №р70 в процессе апоптоза
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Клеточные линии и их культивирование
3.2. Тепловое воздействие и индукция синтеза Н.чр70
3.3. Трансфекция клеток
3.4. Анализ ядерной локализации МусЕЯ после индукции ОНТ
3.5. Индукция и оценка апоптоза
3.6. Анализ кинетики каспазной активности
3.7. Антитела
3.8. Анализ фрагментации клеточной ДНК
3.9. Анализ транслокации цитохрома
3.10. Коиммунопреципитация и лиганд-блоттинг
3.11. Выделение и очистка белков теплового шока семейства 70 кДа
3.12. Статистическая обработка
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Тепловой шок снижает чувствительность опухолевых клеток с 57 высоким содержанием Мус к действию противоопухолевых препаратов.

4.2. Шр70 повышает устойчивость клеток с высокой экспрессией Мус к действию противоопухолевых препаратов
4.3. Молекулярные механизмы подавления Мус-опосредованного апоптоза
4.4. Процесс апоптоза, инициированный у-Мус, специфически подавляется ингибитором каспазы
4.5. Шр70 регулирует активность эффекторных каспаз, но не влияет на высвобождение цитохрома с из митохондрий
4.6. Нвр70 физически взаимодействует с каспазой 3 и каспазой
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

I. ВВЕДЕНИЕ.
Изучение процессов инициации и прогрессии злокачественных новообразований является одной из важнейших задач современной клеточной биологии и медицины. Известно, что огромное разнообразие опухолевых клеток объединяет их повышенная способность к пролиферации. Эта способность обычно складывается из двух компонентов: из увеличенной способности к росту в конкретных условиях (уменьшенной потребности в ростовых факторах, сниженной зависимости от прикрепления и т.п.) и из способности расти неопределенно долгое время (клеточное бессмертие, иммортализация, способность к бесконечно долгой пролиферации).
В настоящее время онкологи применяют три основных, классических или традиционных метода лечения онкологических заболеваний: хирургический,
лучевой и лекарственный (химиотерапия, гормонотерапия). Современная медицина, используя последние достижения науки, продолжает развивать наиболее значимые направления в лечении: гипертермия, гипергликемия, торможение роста опухоли, облегчение доставки лекарств, воздействие на мембраны опухолевых клеток. Существуют также экспериментальные методы, которые показали свою достаточную эффективность и готовы выйти из области научных исследований в широкую клиническую практику: аутопересадка красного костного мозга в сочетании с большими дозами цитостатиков, генная терапия, электрохимиотерапия, фокусированный ультразвук высоких энергий (выжигающая терапия опухолей), применение противоопухолевых вакцин. Разрабатываются и другие методы, которые находятся либо в начальной стадии изучения, либо эффективны лишь при лечении отдельных видов опухолей.
была доказана высокая консервативность Hsp70 (60-78% гомологии между белками эукариот и 40-60% гомологии между белками прокариот и эукариот). Высокий процент гомологии между Grp75 из митохондрий млекопитающих и прокариотического аналога Hsp70 (Dna К) из клеток Escherichia coli, по мнению многих ученых, подтверждает симбиогенетическую гипотезу происхождения митохондрий. В 1986 году английский исследователь Пэлам предположил, что Hsp70 могут связывать и поддерживать в развернутом состоянии белки с нарушенной конформацией (Pelham, 1986). Затем Эллис, сравнивая многочисленные данные о Hsp со своими наблюдениями, сформулировал концепцию молекулярных шаперонов: «Молекулярные шапероны - класс клеточных белков, функцией которых является обеспечение правильности сворачивания определенной (не собственной) полипептидной цепи и последующей сборки олигомерной структуры» (Ellis, 1987).
На сегодняшний день принята условная классификация белков теплового шока, в основе которой лежит молекулярный вес белков (табл.1), хотя функции представителей разных групп белков теплового шока сопряжены.
2.4.2. Семейство Hsp70 и его функции.
Самым распространенным и наиболее хорошо изученным в настоящее время является семейство Hsp70. В одной клетке млекопитающих оно представлено двумя глюкозо-регулируемыми белками - Grp75, Grp78, и двумя цитоплазматическими белками индуцибельным I4sp70 и конститутивным Hsc70.