Клеточные и молекулярные механизмы разрушения суставного хряща при остеоартрозе

• Автор: Четина, Елена Васильевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 234 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. РОСТКОВАЯ ПЛАСТИНКА: КЛЕТОЧНАЯ ФИЗИОЛОГИЯ, ФОРМИРОВАНИЕ ХРЯЩА И МИНЕРАЛИЗАЦИЯ
1.1 .Структура и организация ростковой пластинки
1.2. Особенности хондроцитов ростковой пластинки на клеточном
уровне
1.3.Зональная экспрессия генов и соответствующих им белков в
ростковой пластинке
1.4.Регуляция дифференцировки хондроцитов в ростковой
пластинке
Глава 2. СУСТАВНОЙ ХРЯЩ И ЕГО ОРГАНИЗАЦИЯ
2.1.Строение и зональная структура хряща
2.2. Функциональная характеристика здорового хряща
Глава 3. ВОЗРАСТНЫЕ И ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРЯЩА
3.1. Изменения суставного хряща при старении
3.2. Патологические изменения хряща при остеоартрозе (ОА)
3.3. Специфика молекулярных изменений в суставном хряще в зависимости от степени тяжести ОА
3.4. Ингибирование разрушения хряща при ОА ростовыми факторами
3.5. Роль медиаторов воспаления при остеоартрозе
Глава 4. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Структура и объем выборки
4.2. Подготовка фетальных тканей теленка
4.3. Подготовка суставного хряща, имеющего фокальные повреждения

4.4. Подготовка суставного хряща больных остеоартрозом
4.5. Подготовка суставного хряща взрослого быка
4.6. Культивирование хрящевых эксплантатов
4.7. Культивирование суставных хондроцитов в виде осадочных культур
4.8. Фракционирование и культивирование фетальных хондроцитов
4.9. Определение активности расщепление коллагена II типа коллагеназой с использованием фермент-зависимого иммуносорбентного метода
4.10. Определение коллагеназной активности
4.11. Определение минерализации матрикса, используя включение кальция (45Са2+)
4.12. Биосинтез коллагена и общий оборот белка
4.13. Определение содержания общего количества коллагена 2 типа или степени его денатурации
4.14. Определение содержания и свободных протеогликанов
4.15. Определение содержания общего кальция и фосфата
4.16. Количественное определение секреции простагландина Е2
4.17. Очистка коллагена 2 типа и синтез его производных пептидов
4.18. Электрофорез и иммуноблоттинг
4.19. Иммуногистохимические методы
4.20. Выделение общей РНК
4.21. Обратная транскрипция
4.22. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
4.23. Количественный анализ экспрессии генов посредством ПЦР в режиме реального времени
4.24. Статистический анализ
Глава 5. КООРДИНАЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ И БЕЛКОВ В
ХОНДРОЦИТАХ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ И ГИПЕРТРОФНОЙ ЗОН РОСТКОВОЙ ПЛАСТИНКИ
5.1. Молекулярно-биологические исследования ростковой пластинки быка
5.2. Исследования экспрессии генов; связанных с дифференцировкой хондроцитов и соответствующих им белков в культурах фетальных хондроцитов быка
Глава 6. ПРИЗНАКИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИУГИПЕРТРОФИИ
СУСТАВНЫХ ХОНДРОЦИТОВ ПРИ ФОРМИРОВАНИИ РАННИХ
ПОВРЕЖДЕНИЙ ХРЯЩА У ПОЖИЛЫХ ЛЮДЕЙ
Глава 7. СПОСОБНОСТЬ ФРАГМЕНТА КОЛЛАГЕНА 2 ТИПА ИНДУЦИРОВАТЬ РАСЩЕПЛЕНИЕ КОЛЛАГЕНА И ГИПЕРТРОФИЮ СУСТАВНЫХ ХОНДРОЦИТОВ В ЗДОРОВОМ ХРЯЩЕ БЫКА И ЧЕЛОВЕКА
7.1. Индуция расщепления коллагена 2 типа под действием пептида СВ
7.2.Индуция экспрессии коллагеназ ММР-13 и ММР-1 действием пептида СВ
7.3. Денатурация коллагена 2 типа и экспозиция пептида СВ12-2 во внеклеточном матриксе суставного хряща больного ОА.
7.4. Активация металлопротеиназ матрикса и процесса дифференцировки хондроцитов в здоровом хряще быка при индукции повышенного расщепления коллагена
7.5.Индукция повышенного расщепления коллагена посредством коллагеназы под действием пептида СВ 12-2 сопровождается активацией металлопротеиназ матрикса и дифференцировкой хондроцитов в здоровом хряще человека
Глава 8. РОЛЬ РОСТОВЫХ ФАКТОРОВ В ПОДАВЛЕНИИ РАЗРУШЕНИЯ КОЛЛАГЕНА И ГИПЕРТРОФИИ ХОНДРОЦИТОВ ПРИ ОСТЕОАРТРОЗЕ

поверхностной, а ВКМ обогащен аггреканом. Коллагеновые фибриллы крупнее в диаметре и расположены менее упорядоченно.
Поверхностная зона
Средняя зона
Глубокая зона
Зона кальцификации Субхондральная кость
Рис.6. Зональная структура суставного хряща по A.R. Poole [325].
В глубокой зоне плотность клеток наименьшая. Клетки часто сгруппированы в кластеры и напоминают гипертрофированные хондроциты ростковой пластинки. В этой зоне наблюдается наибольшая концентрация аггрекана и максимальный диаметр фибрилл коллагена, хотя содержание последнего наименьшее. В целом, плотность клеток наибольшая на суставной поверхности и постепенно уменьшается к средней и глубокой зоне на половину и 1/3, соответственно [377, 279]. Количество клеток в хряще также уменьшается с возрастом [22,25,377,139].
К глубокой зоне примыкает зона кальцификации, которая является эффективным сочленением хряща с субхондральной костью и, вероятно,