Эндометриальные стволовые клетки: получение, характеристика и применение для стимуляции развития эндометрия крыс

• Автор: Домнина, Алиса Павловна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 98 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

2. ВВЕДЕНИЕ

• Актуальность проблемы

• Цели и задачи исследования

• Научная новизна работы

• Теоретическое и практическое значение работы -

• Апробация работы

• Основные положения, выносимые на защиту
• История изучения мезенхимных стволовых клеток человека
• Основные характеристики эМСК
• Применение эМСК для регенеративной медицины на экспериментальных моделях
• Получение и культивирование эМСК
• Иммуноцитохимия
• Адипогенная дифференцировка
• Остеогенная дифференцировка
• Изучение кинетики роста
• Анализ активности 8А-(3-галактозидазы
• Кариотипический анализ
• Проточная цитофотометрия
• Криоконсервация эМСК
• Получение мононуклеаров костного мозга крысы
3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

• Подготовка клеток к трансплантации
• Подготовка животных и проведение операции
• Подготовка гистологических срезов и морфометрический анализ
5. РЕЗУЛЬТАТЫ
• Получение и характеристика эМСК
• Трансплантация эМСК в матку псевдобеременным крысам
• Трансплантация ККМ в матку псевдобеременным крысам
6. ОБСУЖДЕНИЕ
7. ВЫВОДЫ
8. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
9. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Ю.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
МСК - мезенхимные стволовые клетки
эМСК - эндометриальные стволовые клетки
ККМ - клетки костного мозга крысы
PBS - фосфатно-забуференный солевой раствор
БДК - большие децидуальные клетки
МДК - малые децидуальные клетки
ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение

10. Получение мононуклеаров костного мозга крысы
В качестве стволовых ККМ использовали мононуклеарную фракцию ККМ (МККМ), выделенную из длинных костей конечностей крыс при помощи промывания костей раствором PBS. Для получения мононуклеарной фракции клеточную суспензию фракционировали в 63%-ном растворе Перколла, центрифугируя при 1500 g в течение 15 мин. Фракцию собирали и отмывали от Перколла в растворе PBS. Клетки считали в камере Горяева.
11. Подготовка клеток к трансплантации
Культивирование клеток эндометрия для подготовки к трансплантации производилось на среде DMEM/F12, содержащей 10 % бычьей эмбриональной сыворотки, 1 % смеси антибиотика и
антимикотика, 1 % глутамакса. На третий - четвертый день после пересева, когда культура клеток достигала монослоя, производилось снятие клеток с подложки и переведение их в суспензию. Для открепления клеток применялась смесь трипсина и EDTA. Поскольку ферментативное действие трипсина может повредить мембраны клеток, что привело бы к снижению их жизнеспособности при трансплантации, применялся трипсин низкой концентрации (0.05%) и на возможно более короткий срок (в пределах 5 мин). Для быстрого действия трипсина после удаления ростовой среды монослой клеток несколько раз промывался раствором PBS. После открепления клеток действие трипсина инактивировалось путем добавления к суспензии достаточного количества ростовой среды с 10% содержанием сыворотки. Для достижения гомогенности суспензия аккуратно пипетировалась. После приготовления одноклеточной суспензии производился подсчет клеток в камере Горяева. Далее культуральная среда заменялась раствором PBS.