Снижение уровня митохондриальных активных форм кислорода приводит к фенотипической нормализации клеток карциномы шейки матки человека

• Автор: Шагиева, Галина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список используемых сокращений

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2Л. Карцинома шейки матки человека

2.2. Механизмы действия вирусов папилломы высокого риска

2.3. Активные формы кислорода

2.4. Функции активных форм кислорода

2.5. Окислительный стресс и антиоксидантные системы клетки

2.6. Синтетические митохондриально-направленные антиоксиданты

2.7. Актиновый цитоскелет

2.7.1. Полимеризация актина
2.7.2. Комплексы, отвечающие за нуклеацию актина
2.7.3. Функции актинового цитоскелета
2.7.4. Изоформы актина
2.7.5. Структуры клетки, образованные актином
2.7.6. Изоформы актина при трансформации клеток
2.8. Адгезионные контакты клеток
2.8.1. Контакты эпителиальных клеток
2.8.2. Кадгерины, общие сведения и изоформы
2.8.3. Е-кадгерин
2.8.4. М-кадгерин
2.8.5. Бета-катенин
2.8.6. Альфа-катенин
2.8.7. Модели образования адгезионных контактов
2.9. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП)
2.9.1. Процесс ЭМП
2.9.2. Переключение изоформ кадгеринов при ЭМП
2.9.3. Участие адгезионных контактов в процессе ЭМП

2.10. Каскады МАР-киназ
2.10.1. Киназы, активированные митогенами
2.10.2. ЕЯК-каскад
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Материалы
3.1.1. Клеточные линии и питательные среды для роста клеток
3.1.2. Реактивы и специфические агенты
3.2. Методы
3.2.1. Иммунофлуоресцентная и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия
3.2.2. Электрофорез и иммуноблоттинг белков
3.2.3. Измерение продукции АФК методом проточной
цитофлу ориметрии
3.2.4. Подсчет количества клеток при изучении пролиферативных характеристик клеточных культур
3.2.5. Статистический анализ
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Характеристика культур и морфологических изменений, вызванных антиоксидантами
4.2. Влияние митохондриально-направленных антиоксидантов на рост нормальных и опухолевых кератиноцитов в культуре
4.3. Организация актиновых микрофиламентов в нормальных и опухолевых кератиноцитах
4.4. Выявление белков межклеточных контактов в нормальных и опухолевых кератиноцитах
4.5. Изучение воздействия эпидермального фактора роста на актиновый цитоскелет и кадгерины в культурах клеток карциномы шейки матки человека

4.6. Влияние ЭФР и митохондриально-направленных антиоксидантов на транскрипционный фактор Snail и каскады MAP-киназ в клетках карциномы шейки матки
4.7. Митохондриально-направленные антиоксиданты снижают уровень рецептора к ЭФР в клетках карциномы шейки матки
4.8. Изучение митохондриальной направленности и антиоксидантных свойств молекул семейства SkQ
5. ОБСУЖДЕНИЕ
5.1. Опухолевая трансформация и окислительный стресс
5.2. Реорганизация актинового цитоскелега опухолевых клеток под воздействием митохондриально-направленных антиоксидантов
5.3. Митохондриально-направленные антиоксиданты повышают экспрессию опухолевых супрессоров Е-кадгерина и альфа-катенина в клетках карциномы шейки матки
5.4. Подавление экспрессии транскрипционного фактора Snail в клетках карциномы шейки матки под воздействием митохондриально-направленных антиоксидантов
5.5. Влияние ЭФР и митохондриально-направленных антиоксидантов на активацию МАР-киназ
5.6. Подавление пролиферации клеток карциномы шейки матки под воздействием митохондриально-направленных антиоксидантов
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
7. ВЫВОДЫ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

структуру. Мутации этих белков, также как и Е-кадгерина, наблюдались при разных типах опухолевых заболеваний и в культурах опухолевых клеток различного происхождения.
Большинство опухолей человека представляют собой карциномы, происходящие из эпителиальных тканей, где в качестве основного кадгерина экспрессируется Е-кадгерин. В эпителиальных опухолях уменьшение или полная потеря Е-кадгерина ведет к прогрессии заболевания. В опухолевых клетках рака молочной железы Е-кадгерин отсутствует, или его содержание снижено (Goldstein, 2002; Hiraguri, 1998). Снижение либо утрата экспрессии Е-кадгерина описаны во многих карциномах человека (Wheelock et al., 2001; Takeichi, 1995; Hirohashi, 1998). Единственная мутация гена Е-кадгерина может быть причиной перехода от аденомы к карциноме. Экспрессия экзогенного Е-кадгерина в клетках трансформированных эпителиальных линий значительно снижает их инвазивный потенциал и восстанавливает нормальный фенотип (Cavallaro and Christofori, 2004).
Различные механизмы инактивации Е-кадгерина (гена CDH1) характерны для опухолевой трансформации: наследственные и соматические мутации, искаженный процессинг белка, повышенное метилирование промотора, индукция транскрипционных репрессоров — белка Snail и белков семейства ZEB (Peinado et al, 2007; Bolos et al., 2003). Гипоксия и микроокружение регулируют активность транскрипционных репрессоров CDH1. Snail и белки семейства ZEB индуцируют процесс реорганизации эпителия, который ведет к переключению синтеза кадгеринов на «мезенхимальные».
2.8.4. N-кадгерин
N-кадгерин является интегральной молекулой адгезии, функционирование которой регулируется белковыми взаимодействиями и фосфорилированием/дефосфорилированием. Мезенхимальные клетки, которые