Механизмы ганглиозид-индуцированной иммуносупрессии Т-лимфоцитов

• Автор: Молотковская, Ирина Михайловна
• Шифр специальности: 03.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 244 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Структура ганглиозидов

2. Биосинтез ганглиозидов

3. Функциональное значение липидных микродоменов

4. Влияние ганглиозидов на функционирование мембранных 30 белков

5. Ганглиозиды при опухолевой трансформации

6. Ганглиозиды и апоптоз

7. Ганглиозиды и их метаболиты в противоопухолевой терапии

8. Г англиозиды как рецепторы вирусных и бактериальных 69 токсинов

9. Подходы к изучению структурно-биологических и лиганд-рецепторных взаимодействий. Фотоаффинное мечение
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Конкурентный тип ингибирования П_,-2 и 1Ь-4-зависимой
пролиферации Т-лимфоцитов, вызываемого ганглиозидами
• Определение параметров ингибирования пролиферации клеток линии СТЬЬ-2 и СТ.4Л под действием ганглиозидов
• Характеристика комплексов ганглиозидов с интерлейкином-
и интерлейкином-4
• Влияние синтетических пептидов 1Ь-4 на ингибирование индуцированной ганглиозидом С£>3 пролиферации 116 лимфоцитов
• Определение фрагментов молекулы 1Ь-4, участвующих во взаимодействии с ганглиозидом, методом фотореактивной пришивки
• Обсуждение результатов

2. Взаимодействие ганглиозида СМ1 с 1Ь-2- и 1Ь-4-рецептором в
клетках линии СТ1Х-
• Влияние ганглиозидов на уровень экспрессии субъединиц
1Ь-2- и 1Ь-4-рецепторов
• Фотореактивная пришивка: локализация ганглиозида СМ1 и субъединиц рецепторов 1Ь-2 и 1Ь-
• Обсуждение результатов
3. Неконкурентный тип ганглиозид-индуцированного
ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов
• Механизмы ганглиозид-индуцированного апоптоза клеток линии СТЬЬ-2. Зависимость апоптотического пути от способа презентации ганглиозидов
• Сравнение способности индивидуальных ганглиозидов индуцировать апоптоз различных субпопуляций Т-лимфоцитов человека
• Участие каспаз в проведении индуцированного ганглиозидами сигнала на апоптоз
• Каспазы и митохондрии
• Участие рифтов в проведении индуцированного ганглиозидами сигнала на апоптоз
• Участие метаболитов гликосфинголипидов в проведении ганглиозид-индуцированного сигнала на апоптоз
• Влияние способа презентации ганглиозидов на проведение сигнала на апаптоз
• Зависимость трафика ганглиозидов в лимфоцитах от способа их презентации клеткам.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АПК антиген-представляющие клетки
АГ аппарат Гольджи
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
ГАБ ганглиозид-активаторный белок
гсл гликосфинголипиды
ИФН интерферон
КонА конканавалин А
МПКЧ мононуклеары периферической крови человека
ПС полная среда
дне центральная нервная система
ЯМР ядерный магнитный резонанс
ЯФХ яичный фосфатидилхолин
AIF фактор, индуцирующий апоптоз
Apaf-1 фактор, активирующий апоптоз (Apoptosis Activating Factor)
ATP аденозинтрифосфат
ASM кислая сфингомиелиназа
AV-GD3 (GM2) антрилвинил-меченый GD3(GM2)
Вах представитель семейства Вс1-2 (Bcl-2-associated X protein)
Bel-2 регулятор апоптоза, представитель семейства Bcl-2 (В-се11 lymphoma),
Bcl-XL регулятор апоптоза, представитель семейства Bcl-2 (В-се11 lymphoma-extra large)
bFGF основной фактор роста фибробластов
BCR В-клеточный рецептор
[Ca2+]j внутриклеточная концентрация кальция
cAMP циклический аденозинмонофосфат
CARD домены, рекрутирующие каспазы (Caspase Recruitment Domains)
C1CCP карбонилцианид-ж-хлорфенилгидразон
CD кластер дифференцировки
CDK Cer-зависимая киназа
CEM мембранные фрагменты, обогащенные холестерином (Cholesterol-Enrichment Membranes)
Cer церамид (N-ацетилсфингозин)
Cer-l-P церамид-1 -фосфат

самым предоставляя место для связывания киназы Syk, содержащей SH2-домен и переключающей сигнальный каскад. Механизм активации тирозинкиназы Lyn при кластеризации BCR мало изучен, однако показано, что процесс трансдукции активационного сигнала связан с функционированием рафтов. Биохимическими методами было показано, что в рафтах сконцентрированы ацетилированные киназы Src-семейства, a BCR в мембранах покоящихся клеток расположены вне рафтов (Langlet et al., 2000). В рафтах покоящихся клеток располагаются также белки с-Abi (Zipfel et al., 2000), PAG/cbp (Kawabuchi et al., 2000), актин, эзрин (Petrie et al., 2000). В жидко-неупорядоченной фазе мембраны, т.е. вне рафта, располагаются многие другие мембранные белки, в том числе CD45 и CD22, рецепторы клеточной поверхности, регулирующие активацию В-лимфоцитов при помощи активной фосфотирозинфосфатазы SHP1.
BCR попадает в рафты сразу же после их стягивания антигеном (Cheng et al., 2001), однако уже через 15-30 мин после активации клетки этот рецептор в упорядоченных микродоменах не обнаруживается. Мультимеризация BCR, концентрирование их в рафтах приводит также к стягиванию в эти домены других белков, участвующих в BCR-зависимом сигнальном каскаде, а именно: Syk, Btk, Vav, SHIP, фосфолипазы Су2, фосфатидилинозит-3 -киназы, BLNK.
По-видимому, фосфорилирование BCR и его взаимодействие с
актиновым цитоскелетом не обязательны для ассоциации с рафтами. Так,
BCR, дефектные по сигналингу или блокированные ингибиторами киназы
Src-семейства, перемещаютя в рафты после их стягивания мультивалентным
лигандом (Cheng et al., 2001). Однако в этом случае ассоциация рецептора с
рафтами нестабильна и ее недостаточно для трансдукции сигнала. Перенос
сигнала в клетку происходит лишь после стабилизации BCR в рафтах, для
чего необходима связь компонентов с цитоскелетом. На этой стадии
происходит кластеризация рафтов; размеры таких кластеров достигают
100 нм - 1-2 мкм, т.е., их можно наблюдать в оптический микроскоп.