Исследование функциональных характеристик изоформ сердечного миозина

• Автор: Копылова, Галина Васильевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Екатеринбург
• Количество страниц: 153 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Сократительные и регуляторные белки сердечной мышцы

1.2. Кальциевая регуляция сокращений сердечной мышцы

1.3. Исследование кальциевой регуляции сокращений сердечной

мышцы методом искусственной подвижной системы

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Получение мышечных белков

2.2. Оценка чистоты полученных белков с помощью

гель электрофореза
2.3. Определение концентрации белков
2.4. Получение регулируемого тонкого филамента
2.5. Определение АТФ-азной активности миозина
2.6. Метод искусственной подвижной системы
2.7. Метод искусственной подвижной системы с регулируемым
тонким филаментом
2.8. Статистическая обработка
Глава 3. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЗОФОРМ
СЕРДЕЧНОГО МИОЗИНА
Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАЛЬЦИЕВОЙ АКТИВАЦИИ ПРОЦЕССОВ ПРИКРЕПЛЕНИЯ И ОТКРЕПЛЕНИЯ ПОПЕРЕЧНЫХ
МОСТИКОВ ДЛЯ ИЗОФОРМ СЕРДЕЧНОГО МИОЗИНА
Обсуждение результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Список сокращений
АТФ - аденозинтрифосфат
БСА — бычий сывороточный альбумин
ДТТ - дитийотрийтол
ЛММ — легкий меромиозин
ПААГ - полиакриламидный гель
ТМРФ - тетраметилродамин-фаллоидин
ТММ - тяжелый меромиозин
ТЦМ - тяжелые цепи миозина
ЭДТА - этилдиметил тетрауксусная кислота
ЭГТА - этиленгликоль тетрауксусная кислота
А7ТтТп - регуляторная группа тонкого филамента, состоящая из актина,
тропомиозина и тропонина
Б-актин - филаментарный актин
О-актин - глобулярный актин
БББ - додецил сульфат натрия
ТпС - тропонин С
Тп1 - тропонин I
ТпТ - тропонин Т
ХЬ - поперечный мостик
ХЬ-ТпС - мостико-тропонин С кооперативность
Б1 - субфрагмент 1 миозина
Б2 - субфрагмент 2 миозина
ЬС - легкие цепи миозина
>ПЕМ - М-этилмалеимид
рРБМ - БДБГ-фенилендималеимид
Таблица названий и обозначений аминокислот
А Ala Alanine
R Arg Arginine
N Asn Asparagine
D Asp Aspartic Acid
С Cys Cysteine
Q Gin Glutamine
Е Glu Glutamic Acid
G Gly Glycine
Н His Histidine
I lie Isoleucine
L Leu Leucine
К Lys Lysine
м Met Methionine
F Phe Phenylalanine
Р Pro Proline
S Ser Serine
т Thr Threonine
W Trp Tryptophan
Y Tyr Tyrosine
V Val Valine
Аланин
Аргинин
Аспарагин
Аспарагиновая кислота
Цистеин
Глутамин
Глутаминовая кислота
Г лицин
Г истидин
Изолейцин
Лейцин
Лизин
Метионин
Фенилаланин
Пролин
Серии
Треонин
Триптофан
Тирозин
Валин

также осуществляться через взаимодействие между актинами. Данный источник кооперативности позволяет объяснить крутой характер кривой зависимости между силой и концентрацией кальция [87].
И четвертый механизм, прямая активация тонкого филамента сильносвязанными поперечными мостиками независимо от связывания Са2+. Сильносвязанные поперечные мостики могут усиливать активацию этой же самой регуляторной единицы и соседних регуляторных единиц. Факторы, которые изменяют присоединение или доступность поперечных мостиков (такие как уменьшение расстояния между тонкими и толстыми филаментами, а также увеличение длины саркомера или движение головки миозина от тонкого филамента, позволяющее фосфорилироваться легким цепям миозина) могут усиливать кальциевую чувствительность и/или крутизну кривой «рСа-сила».
Наиболее изучены первые два типа кооперативности, влияющие на кинетику связывания/распада комплексов СаТпС (следовательно, на образование миозиновых поперечных мостиков), т.е. играющие ключевую роль в процессах регуляции сокращений: тропонин-тропониновая и мостико-тропониновая кооперативность.
Grabarek с соавторами [44] в растворных экспериментах установили реальное наличие кооперативной зависимости сродства ТпС к кальцию как от концентрации прикрепленных головок миозина, так и от концентрации СаТпС комплексов. В свою очередь Gordon и M.G Bell в работах на скинированном скелетном волокне и сердечной трабекуле с помощью линейного дихроизма показали, что сильное связывание поперечных мостиков в сердечной трабекуле вызывает структурные изменения в ТпС, тогда как в скелетном волокне такого эффекта не наблюдалось [87, 115, 127].
Механизмы кооперативности сократительных белков имеют большое значение для регуляции сокращений интактной сердечной мышцы. Как было описано выше, в рамках интактного сердца имеется значительное различие в экспрессии изоформ миозинов VI и V3 как в различных регионах сердца, так и