Индукция генетической нестабильности Podospora anserina (Rabenh.) Niessl в процессе продолжительного глубинного культивирования

• Автор: Кудрявцева, Ольга Александровна
• Шифр специальности: 03.02.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 322 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Цели и задачи исследования

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика и «синдром старения» Р. атегта

1.1.а. Особенности организации мицелиальных грибов. Явление старения у грибов

1.1.6. Диагностические признаки, экология и распространение

Р. атегта

1.1. в. Жизненный цикл Р. атегта

1.2. Молекулярные механизмы старения Р. атегта

1.2.а. Нестабильность митохондриального генома Р. атегта
1.2.6. Генерация митохондриями активных форм кислорода
1.2.в. Участие ядерного аппарата в регуляции продолжительности жизни Р. атегта
1.3. Культивирование мицелиальных грибов в погруженных условиях
1.3.а. Морфофизиологическая характеристика погруженных культур мицелиальных грибов
1.3.6. Роль стрессов в процессах адаптации и дифференцировки у грибов
1.3.в. Окислительный стресс в погруженных культурах грибов
1.4. Генетическая нестабильность микроорганизмов
1.4.а. Явление генетической нестабильности у грибов
1.4.6. Взаимосвязь между старением и генетической нестабильностью
1.4.В. Стресс-индуцируемый и адаптивный мутагенез

1.4.г. Канализация эволюции. Блочно-модульный принцип эволюции
1.5. Биотехнологические перспективы селекции генетических вариантов в условиях продолжительного глубинного культивирования
1.5.а. Цели и методы современной биотехнологии
1.5.6. Примеры изменения свойств культур микроорганизмов в процессе продолжительного погруженного культивирования (эволюционная инженерия)
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объекты и условия культивирования
2.2. Получение моноспоровых изолятов Р. атегта и определение типа спаривания
2.3. Продолжительное глубинное культивирование Р. атегта. Схемы постановки экспериментов
2.4. Генетический анализ изолятов Р. атегта... '
2.5. Оплодотворение Р. атегта вегетативным мицелием
2.5.а. Оплодотворение методом смывов с поверхности колоний, проведенных без фильтрации
2.5.6. Оплодотворение методом точечного нанесения мицелия
2.6. Цитологические наблюдения
2.6.а. Световая микроскопия
2.6.6. Трансмиссионная электронная микроскопия
2.7. Анализ каротиноидных пигментов Р. атегта и N. сгаяяа
2.7.а. Идентификация и определение общего содержания каротиноидных пигментов в мицелии
2.7.6. Определение качественного состава и относительного содержания каротиноидов
2.7.в. Культивирование N. сгаяза и стимуляция синтеза каротиноидов
2.8. Тест на устойчивость Р. атегта к антимицину А
2.9. Саузерн-блот гибридизация мтДНКР. атегта
2.10. Количественная ОТ-ПЦР гена аох Р. атегта
2.11. Выделение протопластов, измерение скорости их дыхания и продукции АФК
2.12. Продолжительное качалочное культивирование АНегпапа агЬогеясет
2.13. Статистическая обработка полученных данных
Глава 3, Динамика изменения' мицелия Р. атегта в условиях продолжительного глубинного культивирования
3.1. Опытные штаммы Р. атегта в стандартных условиях роста
3.2. «Реанимирование» стареющего мицелия Р. атегта в жидкой среде
3.3. Морфофизиологические особенности Р. атегта при длительном качалочном культивировании
3.3. а. Фаза I, или начальная фаза качал очного культивирования
3.3.6. Фаза II, или переходная фаза
3.3.в. Фаза III, или фаза стабильного роста:
3.4. Морфофизиологические особенности Р. атегта при длительном статическом культивировании
3.5. Продолжительное качалочное культивирование А. агЬогезсет
Глава 4. Характеристика изолятов из длительно поддерживаемых глубинных культур Р. атегта
4.1. Продолжительность жизни изолятов Р. атегта в зависимости от типа и возраста глубинной культуры
4.2. Суммарная длина мицелия и скорость роста изолятов Р. атегта
4.3. Морфология изолятов Р. атегта
4.3.а. Морфология изолятов, полученных из качалочных культур
4.3.6. Морфология изолятов, полученных из статических культур
4.3 .в. Морфология митохондрий у изолятов Р. атегта
INTERMEMBRANE SPACE
MATRIX
Рис. 8. Схема электрон-транспортной (дыхательной) цепи P. anserina (Lorin et al., 2006).
Комплекс I: НАДН-дегидрогеназа; комплекс II: сукцинатдегидрогеназа;
комплекс III: цитохром bcl-комплекс; комплекс IV: цитохром с-оксидаза (СОХ); комплекс V: АТФ-синтаза. Q - пул убихинонов; с - цитохром с; Extl и Ext2 -внешние НАД(Ф)Н-дегидрогеназы; Inti - внутренняя НАД(Ф)Н-дегидрогеназа; АОХ - альтернативная оксидаза (убихинол-кислород-оксидоредуктаза). MATRIX - матрикс митохондрии; INTERMEMBRANE SPACE -межмембранное пространство.
комплексов входят переносчики электронов: их простетические группы, или редокс-центры, формируют пути переноса электронов. Связь между комплексами осуществляют подвижные переносчики электронов -убихинон (Q) и цитохром с. Комплекс IV, или цитохромоксидаза (СОХ),