Роль транскрипционного фактора FRA1 в патогенезе псориаза

• Автор: Золотаренко, Алена Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Псориаз, генетика и иммунопатогенез заболевания

1.1.1. Г єн етика и эпигенетика псориаза

1.1.2. Иммунопатогенез псориаза

1.2. Сравнительный анализ различных методов изучения экспрессии генов

1.2.1. Исследование псориаза с помощью технологии микрочипов

1.2.2. Полногеномное секвенирование транскриптома при анализе патологий кожи

1.3. АР-1 и его роль в иммунитете и воспалении

1.3.1. Общие характеристики семейства АР-

1.3.2. Семейство JUN
1.3.3. Семейство FOS: FOS, FOSB, FRA
1.4. FRA1, его основные характеристики
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологический материал
2.2. Ферменты и реактивы
2.3. Клеточные линии и штаммы
2.4. Выделение РНК из кожи с применением реактива Trizol
2.5. Выделение РНК из кожи на колонках
2.6. Обратная транскрипция
2.7. Количественная ПЦР в реальном времени
2.8. Культивирование клеточных линий
2.9. Создание конструкций для гиперэкспрессии FRA

2.10. Получение вирусных частиц для заражения клеток
2.11. Индуцибельная гиперэкспрессия FRA
2.12. Вестерн-блот гибридизация
2.13. Ингибирование экспрессии FRAJ методом РНК-интерференции
2.14. Иммуногистохимическое окрашивание при помощи системы визуализации NOVOLINK
2.15. Массивное параллельное секвенирование РНК по технологии SOLID 4
2.16. Статистическая обработка результатов
2.17. Обогащение генных сетей дифференциально экспрессированными генами при помощи программного пакета MetaCore
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Оценка полногеномных профилей экспрессии при псориазе
3.2. Сигнальные каскады, измененные при псориазе
3.3. Поиск основных регуляторов транскрипции, связанных с развитием заболевания
3.4. Карты генных взаимодействий, обогащенные дифференциально экспрессированными при псориазе генами
3.4.1. Ремоделирование внеклеточного матрикса
3.4.2. Ремоделирование цитоскелета кератиноцитов
3.4.3. Клеточный цикл и пролиферация
3.4.4. Цитокин-опосредованные сигнальные каскады
3.5. Транскрипционный фактор АР-1 и его роль в развитии псориаза
3.6. Оценка экспрессии генов АР-1 при псориазе
3.7. Оценка накопления белка FRA1 в пораженной псориазом коже

3.8. Роль регуляции FRAI и его гены-мишени
3.9. Изменения экспрессии мишеней при сверхэкспрессии FRA1.
3.10. Изменения экспрессии мишеней при ингибировании FRA1..
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

регуляторных функций, а также за специфичность и стабильность димеров, а 1Ч-терминальный домен - за связывание транскрипционного фактора с ДНК (Рисунок 4) (Неяя .1. е1 а!., 2004).
Т G A G Т С А
Трансактивационный домен семейства FOS

Трансактивационный домен семейства JUN

Основной домен: связывание с ДНК
Домен «лейциновой застежки»: димеризация
j—| С-терминальный
трансактивационный домен FOS □ 5-домен: связывание киназы JNK, отсутствует в v-Jun
П Трансактивационный домен JUN □ DEF Д0Мен: киназный домен ERK
Рисунок 4. Гетеродимер JUN-FOS. Домены bZIP двух белков формируют X-подобную а-спираль, которая связывается с палиндромом TGAGTCA. Последовательность белка JUN показана синим, FOS - красным, кроме того, показаны трансактивационные и киназные домены (Hess J. et al., 2004).
Белки семейства JUN могут образовывать как гомо-, так и гетеродимерные комплексы. Белки семейства FOS не могут образовывать гомодимеры и функционируют лишь в виде комплексов с белками Jun, повышая их ДНК-связывающую активность. Различные белки семейств имеют разный потенциал трансактивации. JUN, FOS и FOSB считаются сильными активаторами, a JUNB, JUND, FRA1 и FRA2 - слабыми. Будучи слабыми активаторами, JUNB, JUND, FRA1 и FRA2, образуя малоактивные димеры с JUN, FOS и FOSB, могут выступать в качестве негативных регуляторов активности АР-1 (Hess J. et al., 2004). Состав димеров оказывает очень большое влияние на регуляторные функции комплекса. Например, показано, что образование димеров FOS:JUN