Экспрессия ключевых генов ренин-ангиотензиновой системы у гипертензивных крыс НИСАГ

• Автор: Федосеева, Лариса Абрамовна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 262 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Артериальная гипертония

1.1.1. Моногенные, или менделевские формы гипертонии

1.1.2. Полигенные формы артериальной гипертонии. Гипертоническая болезнь, или эссенциальная гипертония

1.1.3. Изучение гипертонии на животных моделях

1.1.3.1. Крысы НИСАГ

1.1.4. Стресс как фактор, провоцирующий развитие артериальной гипертонии

1.2. Физиологические системы и их роль в повышении АД

1.2.1. Симпатоадреналовая система и контроль артериального давления
1.2.2. Ренин-ангиотензин-альдостероновая система (РАС): ее роль в регуляции АД и в формировании гипертензивного статуса
1.2.2.1. Регуляция циркулирующей РАС - классические пути
1.2.2.2. Основные компоненты РАС
1.2.2.2.1. Ренин
1.2.2.2.2. Ангиотензиноген
1.2.2.2.3. Ангиотензин-превращающий фермент (АСЕ)
1.2.2.2.4. Агщ II и его рецепторы
1.2.2.2.5. «Новые» компоненты РАС
1.2.2.3. Локальные тканевые РАС
1.2.2.3.1. Почечная РАС
1.2.2.3.2. РАС в сердце
1.2.2.3.2.1. Функции кардиальной РАС
1.2.2.3.3. РАС мозга
1.2.2.3.3.1. Функции мозговой РАС
1.2.2.3.4. Адренальная РАС
1.2.2.3.4.1. Функции РАС в надпочечнике
1.2.2.3.5. Сосудистая РАС
1.2.2.3.5.1. Функции сосудистой РАС
1.2.2.3.6. Другие тканевые РАС

1.2.2.4. Значение внутриклеточной РАС
1.2.3. Циклооксигеназы и синтез простагландинов
1.2.3.1. Структура и клеточный синтез ПГ
1.2.3.2. Формы цнклооксигеназ
1.2.3.3. Рецепторы простаноидов
1.2.3.4. Регуляция цнклооксигеназ
1.2.3.4.1. Регуляция СОХ на уровне транскрипции
1.2.3.4.2. Регуляция цнклооксигеназ на пост-транскрипционном пре-трансляционном уровне
1.2.3.4.3. Регуляция цнклооксигеназ на пост-трансляционном уровне
1.2.3.5. Циклооксигеназы и простаноиды в здоровье и болезни
1.2.3.5.1. СОХ-1 и СОХ-2 в центральной нервной системе
1.2.3.5.1.1. Простагландины в ЦНС
1.2.3.5.1.2. Простагландины и стресс - связь с ГГАС и СНС
1.2.3.5.2. СОХ-2 и синтез простагландинов в надпочечниках
1.2.3.5.3. СОХ-2 в почках
1.2.3.5.3.1. Почечные эффекты простагландинов
1.2.3.5.4. Сердечнососудистая системам простагландины
1.3. Современные представления о механизмах возникновения гипертонии
1.3.1. Гипотеза единого пути развития эссенциальной гипертонии
1.4. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1.Материал ы
2.2. Праймеры
2.3.Экспериментальные животные
2.3.1 .Артериальное давление
2.4. Водная депривация
2.5. Выделение суммарной РНК из тканей
2.6. Получение кДНК (обратная транскрипция)
2.7. Определение уровней содержания мРНК
2.7.1. Построение калибровочных кривых при ПЦР в реальном времени
2.7.2. Определение относительных уровней мРНК методом ПЦР в реальном времени с применением красителя SYBR Green I
2.7.3. Статистическая обработка результатов
2.8. Выделение ДНК из печени крыс
2.9. Определение нуклеотидной последовательности 5’-области гена
2.9.1. Полимеразная цепная реакция
2.9.2. Секвенирование
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Экспрессия генов РАС у крыс ¥АО и НИСАГ
3.1.1. Уровень экспрессии генов РАС в почках
3.1.1.1. Экспрессия генов РАС в почках молодых (1,5 мес) крыс
3.1.1.2. Уровень мРНК генов РАС в почках зрелых (4 мес) крыс в покое и при водной депривации
3.1.2. Экспрессия генов РАС в миокарде
3.1.2.1. Уровень мРНК генов РАС у молодых (1,5 мес) крыс
3.4.2.2. Уровень мРНК генов РАС у зрелых (4 мес) крыс в покое и при водной депривации
3.1.3. Экспрессия генов РАС в мозговых структурах
3.1.3.1. Уровень мРНК генов РАС у молодых (1,5 мес) крыс
3.1.3.1.1. Уровень мРНК генов РАС в гипоталамусе
3.1.3.1.2. Уровень мРНК генов РАС в продолговатом мозге
3.1.3.2. Уровень мРНК генов РАС в мозге зрелых (4 мес) крыс
3.1.3.2.1. Уровень мРНК генов РАС в гипоталамусе в покое и при водной депривации
3.4.3.2.2. Уровень мРНК генов РАС в продолговатом мозге
3.1.4. Экспрессия генов РАС в надпочечниках
3.1.4.1. Уровень мРНК генов РАС у молодых (1,5 мес) крыс
3.1.4.2. Уровень мРНК генов РАС у зрелых (4 мес) крыс в покое и при водной депривации
3.1.5. Экспрессия гена Асе в легких
3.2. Экспрессия гена 1Ъ у крыс линий УАО и НИСАГ в состоянии покоя и стресса водной депривации
3.2.1. Уровень мРНК гена П в надпочечниках
3.2.2. Уровень мРНК гена П в мозговых структурах
3.3. Экспрессия гена Сох-2 у крыс линий ’УАС и НИСАГ в состоянии покоя и стресса
водной депривации
3.3.1. Уровень мРНК гена С.ох-2 в почках
3.3.1.1. Уровень мРНК гена Сох-2 в почках молодых крыс
3.3.1.2. Уровень мРНК гена Сох-2 в почках взрослых крыс

Ang (1—12) может быть альтернативным предшествующим субстратом для образования биоактивных ангиотензиновых пептидов в сердце, почках и циркуляции, что может зависеть от локализации одного из действующих на него ферментов, АСЕ, но не ренина.
Рецептор АТ2. Как было упомянуто выше, вторым важным (и клонированным) рецептором Ang II является рецептор АТ2. АТ2 - это рецептор класса GPCR, состоящий из 363 аминокислотных остатков. Он имеет некоторую (34%) гомологию аминокислотной последовательности с рецептором ATI (Mukoyama et al., 1993).
Из обзора в обзор повторяется фраза о том, что «рецептор АТ2 высоко экспрессируется в фетальных мезенхимальных тканях как грызунов, так и человека; однако в течение нескольких дней после рождения экспрессия рецептора АТ2 быстро падает до очень низких уровней». Тщательный литературный поиск указывает на то, что данное утверждение основывается на нескольких работах 1991 года (см. у Gallinat et al., 2000) и с тех пор кочует по большинству обзорных работ, посвященных экспрессии генов РАС и рецепторов Ang II, в частности.
Недавние исследования (Gao, Zucker, 2011) выявили различные профили изменения содержания рецепторов ангиотензина у крыс и мышей во время развития, что противоречит взглядам, упомянутым выше. Используя Вестерн-блот-анализ, исследователи убедительно показали, что в стволе мозга, печени и почках взрослых крыс и мышей наблюдаются уровни экспрессии белка, значительно большие для АТ2, но намного меньшие для ATI, по сравнению с эмбрионами или новорожденными животными (Yu et al., 2010). Был показан постепенный рост экспрессии АТ2 в стволе мозга в процессе созревания от плода до взрослого животного.
Причина расхождений в экспрессии белка рецепторов и предшествующих авторадиографических данных не до конца ясна. Авторадиография - это классический метод определения связывания рецептора и лиганда, который является высокочувствительным, но его точность сильно зависит от специфичности используемых агонистов или антагонистов. В упомянутых исследованиях (Millan et al., 1991; Cook et al., 1991) изучали связывание на уровне целого животного, а не избранных областей мозга. Более того, эти результаты основывались в первую очередь на изменениях в связывании в ответ на антагонисты ATI или АТ2, в то время как в работе Yu и др. (2010) использовали специфические антитела для оценки экспрессии белка в различных областях мозга.
Так или иначе, но белок рецептора ясно определяется Вестерн-блотом в зрелых почках, сердце и кровеносных сосудах. В почке взрослых рецептор АТ2 экспрессируется в клубочковых эпителиальных клетках, кортикальных канальцах и интерстициальных клетках (Ozono et al., 1997). В сердце рецептор локализуется в предсердии и вентрикулярном миокарде и в клетках гладкой мускулатуры коронарных артерий (Wang et al., 1998b). В человеческом сердце рецептор АТ2 доминирует над рецептором ATI (Carey & Siragy, 2003а). По-видимому,