Анализ действия эндонуклеазы в комбинации с "бетадином" на клетки организмов различных таксономических групп

• Автор: Зайнутдинова, Эльмира Фаритовна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 136 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологические эффекты нуклеаз

1.1.1. К вопросу о биологических эффектах нуклеаз

1.1.2. Стимулирующее действие нуклеаз на про- и эукариоты

1.1.3. Противоопухолевое действие нуклеаз

1.1.4. Противовирусное действие нуклеаз

1.1.5. Антимикробный эффект эндонуклеазы Serratia marcescens в сочетании с йодохлорином

1.2. Характеристика йодофора «Бетадин»

1.3. Основные характеристики эндонуклеазы Serratia marcescens
1.4. Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Исследуемое соединение и объекты исследования
2.2. Питательные среды и условия культивирования
2.3. Подготовка посевного материала и суспензии
2.4. Подготовка и выращивание культуры клеток гепатомы H4-II-E-C3
2.5. Оценка жизнеспособности
2.6. Определение эндонуклеазы на жизнеспособность вирусов, бактерий S.marcescens, B.subtilis, дрожжей S.cerevisiae
2.7. Определение влияния эндонуклеазы на жизнеспособность культуры клеток гепатомы (H4-II-E-C3)
2.8. Определение влияния «Бетадина» на жизнеспособность вирусов, бактерий S.marcescens, B.subtilis, дрожжей S.cerevisiae и культуры клеток гепатомы
2.9. Определение влияния эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином»
на жизнеспособность вирусов, бактерий S.marcescens, B.subtilis,
дрожжей S.cerevisiae и культуры клеток гепатомы

2.10. Определение влияния эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на жизнеспособность культуры клеток гепатомы
2.11. Электронная микроскопия и подготовка препаратов для электронной микроскопии
2.12. Определение оптической плотности
2.13. Определение действия «Бетадина» на активность эндонуклеазы
2.14. Определение ферментативной активности
2.15. Определение концентрации белка в растворе
2.16. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Исследование эффективности действия гомогенной эндонуклеазы Я. тагсеБсет на бактерии, вирусы, дрожжи и культуру клеток гепатомы
3.1.1. Получение препарата эндонуклеазы
3.1.2. Определение антивирусной активности
3.1.3. Анализ действия эндонуклеазы на бактерии
3.1.4. Исследование действия эндонуклеазы на дрожжи S.cerevisiae
3.1.5. Анализ действия эндонуклеазы на культуру клеток гепатомы
3.2. Оценка эффективности действия растворов «Бетадина» на
бактерии, вирусы, дрожжи и культуру клеток гепатомы
3.2.1. Антивирусный эффект «Бетадина»
3.2.2. Анализ действия «Бетадина» на бактерии
3.2.3. Анализ действия «Бетадина» на дрожжи У. сегетшае
3.2.4. Анализ действия «Бетадина» на культуру клеток гепатомы
3.3. Определение эффективности действия эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на бактерии, вирусы, дрожжи и культуру клеток гепатомы
3.3.1. Определение влияния «Бетадина» на активность эндонуклеазы
3.3.2. Действие эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на

жизнеспособность вирусов
3.3.3. Действие эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на жизнеспособность бактерий
3.3.4. Действие эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на жизнеспособность дрожжей Хсегетыше
3.3.5. Действие эндонуклеазы в комбинации с «Бетадином» на жизнеспособность культуры клеток гепатомы
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

С помощью сшивающего бифункционального реагента диметилсуберимедата было установлено, что при оптимальном для проявления каталитической активности значении pH растворы изоформ Sml и Sm2 нуклеазы S.marcescens полидисперсны и состоят из мономеров и димеров. Одновременное присутствие мономеров и димеров наблюдалось в 6 мкМ растворах изоформ и позволяло предположить их динамическое равновесие в зависимости от окружающей среды. Наличие димеров в гомогенных препаратах изоформ Sml и Sm2 свидетельствовало о том, что олигомеры нуклеазы S.marcescens могут образовываться субъединицами одного и того же типа. Немецким ученым удалось получить искуственные ковалентные димеры из рекомбинантных мономеров эндонуклеазы, в которые в отличие от природных мономеров были введены точечные аминокислотные замены для успешного сшивания бифункциональным реагентом (Franke I. et al., 1999). Исследование таких димеров показало, что субъединицы функционируют независимо друг от друга. Следовательно, при низких концентрациях фермента, димерное состояние имеет большое значение для проявления активности эндонуклеазы, так как димеры будут более эффективно расщеплять высокомолекулярный субстрат, чем мономеры. В случае неактивных димеров эндонуклеазы образуются нерастворимые фермент-субстратные комплексы, что приводит к образованию осадка. Есть сведения, полученные с помощью компьютерного моделирования, доказывающие существование димеров эндонуклеазы (Chen
C. et al., 2006). Поскольку для ряда ферментов продемонстрировано, что межбелковые взаимодействия модулируют их функциональную активность (Rudyak S. et al., 2001), уровень структурной организации молекул эндонуклеазы, должен оказывать влияние и на механизм действия фермента, и на его биологическую активность, и на физико-химические и биохимические свойства.
Хотя природная функция эндонуклеазы неизвестна, есть мнение, что она играет какую-то существенную роль при SOS-ответе клетки на повреждение