Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования

• Автор: Правдивцева, Мария Ивановна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 136 с. : ил.

Список условных сокращений АМФ - альвеолярные макрофаги ВСС - массовая доля связанной влаги ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИАК - индекс активации киллинга ИЛ - интерлейкин ИФА - иммуноферментный анализ КОЕ/г - колониеобразующие единицы на грамм МПА - мясо-пептонный агар ПМФ - перитонеальные макрофаги ФНО - фактор некроза опухоли ЭПС - экзополисахариды

СОДЕРЖАНИЕ

Список условных сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Молочнокислые бактерии

1.1.1. Характеристика молочнокислых бактерий

1.1.2. Роль молочнокислых бактерий рода Lactobacillus

в организме животных

1.2. Полисахариды бактерий рода Lactobacillus:
биологическая активность и их применение
2. Экспериментальная часть
2.1. Объект и методы исследований
2.1.1.1. Объект исследований
2.1.1.2. Среды, используемые для культивирования бактерий
2.1.2. Методы исследований
2.1.2.1. Выделение и очистка лаксаранов
2.1.2.2. Исследование токсичности лаксаранов
2.1.2.3. Моделирование экспериментального стресса
2.1.2.4. Определение микрофлоры толстого кишечника животных
2.1.2.5. Выделение альвеолярных и перитонеальных макрофагов
2.1.2.6. Моделирование процесса фагоцитоза in vivo
2.1.2.7. Определение провоспалительных цитокинов
2.1.2.8. Определение ранозаживляющих свойств
лаксаранов
2.1.2.9. Определение антимикробной активности
в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры
2.2.10. Создание рецептуры сыровяленой колбасы
2.1.2.11. Методы определения качества сыровяленых колбас

2.1.2.12. Определение микробиологических свойств сыровяленых колбас
2.1.2.13. Статистическая обработка
2.2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Оценка токсичности лаксаранов на биотест-объекте
Colpoda steinii
2.2.2. Изучение влияния лаксаранов на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса
2.2.3. Влияние лаксаранов in vivo на активность и завершенность процесса фагоцитоза бактерий
2.2.4. Изучение влияния лаксаранов на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе бактерий
2.2.5. Исследование ранозаживляющих свойств лаксаранов
и пленок, созданных на основе лаксаранов
2.2.6 Определение антимикробной активности лаксаранов
и пленок, созданных на основе лаксаранов в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры
2.2.7. Влияние лаксаранов на выход готового продукта и структурно-механические, физико-химические,
микробиологические свойства сыровяленых колбас
Заключение
Выводы
Список использованных литературных источников
Приложения

2.1.2. Среды, используемые для культивирования бактерий
Для выращивания молочнокислых бактерий использовали среду А. Velman с соавт. (2003), которая состояла из (г/л): лактозы - 20,0; дрожжевого экстракта - 5,0; гидролизата казеина - 20,0; К2НР04 - 2,0; М£804-7Н20 - 0,1; Мп804-4Н20 - 0,05; цитрата аммония - 2,0; ацетата натрия - 5,0; твин-80 - 1,0 мл/л и гидролизованное молоко; для стафилококков - желточно-солевой агар, для эшерихий - Эндо [103], для псевдомонад - Плоскирева, для сальмонелл -Висмут-сульфит агар, для грибов - Сабуро [59].
2.1.2. Методы исследований
2.1.2.1. Выделение и очистка лаксаранов
Лаксараны 1596, 1936, Ъ выделяли из культур Ь. сІеІЬгиескіі эибэр. сіеІЬгиескіі В-1596, Ь. сІеІЬгиескіі В-1936 и Ь. сІеІЬгиескіі ээр. Ьиагісш по методу А. Шеішап в модификации Е.В. Полукарова [69, 70], выращивая их в течение 48 часов на питательной среде А.Velman с соавт. [183] при температуре 38 °С. Культуральную жидкость после выращивания лактобацилл, центрифугировали при 16660g в течение 30 мин и температуре 4 °С. Осадок биомассы удаляли. Затем культуральную жидкость, освобожденную от клеток бактерий, упаривали приблизительно в 20 раз. Двойной объем 96% охлажденного этилового спирта (3-5 °С) вносили в полученный концентрат. Осаждение экзополисахаридов (ЭПС) проводили в течение 1,5 часов при температуре 3-5 °С. После центрифугировали при 4000g в течение 15 мин, с дальнейшим удалением надосадочной жидкости. Образовавшийся осадок растворяли в 30 мл дистиллированной воды. Затем еще раз центрифугировали в тех же условиях. В дальнейшем ЭПС очищали от низкомолекулярных соединений с помощью диализа против бидистиллиро-ванной воды в течение 12 часов при температуре 8-10 °С. Проводили гель -фильтрацию на колонке с Тоуореагі — 55Р для окончательной очистки препарата от высокомолекулярных соединений. Использовали фосфатный буфер в качестве элюента 0,05 М (pH 5,5).