Критерии оценки лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов культуральными методами

• Автор: Исаева, Юлия Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие о лекарственной устойчивости М. tuberculosis j |

1.2. Принципы и методы культурального определения лекарственной чувствительности М.

tuberculosis

1.3. Определение лекарственной чувствительности М. tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Бактериальные штаммы

2.2. Лекарственные препараты
2.3. Микробиологические методы
2.4. Молекулярно-генетические методы
2.5. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРИТИЧЕСКИХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЛЕВОФЛОКСАЦИНА, МОКСИФЛОКСАЦИНА И ГАТИФЛОК-САЦИНА ДЛЯ ОЦЕНКИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ М. TUBERCULOSIS В СИСТЕМЕ ВАСТЕС MGIT 960 И МЕТОДОМ АБСОЛЮТНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ НА СРЕДЕ ЛЕ-ВЕНШТЕЙНА-ЙЕНСЕНА
3.1. Формирование стандартной панели клинических штаммов
М. tuberculosis
3.2. Определение минимальных ингибирующих концентраций изучаемых фторхинолов
3.2. Установление критических концентраций изучаемых фторхинолонов
ГЛАВА 4. ТЕСТ-СИСТЕМА SENSITITRE MYCOTB ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ M.TUBERCULOSIS
ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ M.TUBERCULOSIS К ПРЕПАРАТАМ ГРУППЫ ФТОРХИНОЛОНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗ-

ЛИЧНЫХ МЕТОДОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ГКУЗ МНПЦ Государственное казенное учреждение здравоох-
борьбы ранения «Московский городской научно-практический
с туберкулезом Центр борьбы с туберкулезом Департамента здра-
ДЗМ воохранения города Москвы»
ДИ Доверительный интервал
КК Критическая концентрация
Л-Й Левенштейна-Иенсена плотная питательная среда
ЛУ Лекарственная устойчивость
ЛЧ Лекарственная чувствительность
МБТ Микобактерии туберкулеза
МИК Минимальная ингибирующая концентрация
эдду Множественная лекарственная устойчивость возбу-
дителя
ОПЦ Отрицательная прогностическая ценность
ППЦ Положительная прогностическая ценность
ПТП Противотуберкулезные препараты
РЕ Ростовые единицы
ШЛУ Широкая лекарственная устойчивость возбудителя
CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт
клинических и лабораторных стандартов США)
Bactec 960 Автоматизированная система BactecMGlTFM
GTX Гатифлоксацин
LVX Левофлоксацин
МОХ Моксифлоксацин
МусоТВ Тест-система Sensititre МусоТВ
М7Н9 Жидкая среда Middlebrook 7Н
М7Н10 Агаровая среда Middlebrook 7НЮ
OFX Офлоксацин

бирки MGIT с препаратом и ее разведение 1:100 в контрольной пробирке без препарата в объеме 0,5 мл. Предварительно в пробирки MGIT с модифицированной бульонной основой М7Н9 (7 мл) добавляли по 0,8 мл обогатительной ростовой добавки BactecMGIT 960 SIRE Supplement (Becton, Dickinson and Company, USA) и no 0,1 мл раствора препаратов необходимой концентрации только в опытные пробирки. Инкубировали пробирки MGIT на штрих-код держателе в системе Bactec 960. Учет результатов осуществлялся прибором автоматически при сравнении ростовых единиц (РЕ) в контрольной пробирке (РЕ=400) с количеством ростовых единиц в опытных пробирках в течение 5-12 дней с момента начала инкубации. Штамм оценивали как чувствительный при РЕ <100, устойчивый - при РЕ >100. Минимальной ингибирующей концентрацией препарата считали наименьшую концентрацию, которая подавляла рост МБТ. Так как в конфигурации прибора отсутствует протокол определения JI4 к препаратам резервного ряда, с этой целью использовали стандартный протокол исследования ЛЧ к ПТП основного ряда, учитывая при установлении МИК, указанные концентраций изучаемого фторхинолона на пробирках MGIT.
Минимальные ингибирующие концентрации LVX, МОХ и GTX на плотной среде Л-Й определяли методом серийных разведений, согласно методическим рекомендациям В.Н. Степаншиной и соавт. (2009) [62]. Суспензию исследуемых культур МБТ готовили по стандарту мутности №5 (ГИСК им. Л.А. Тарасевича) и в разведении 1:10 (5x107 КОЕ/мл) объемом 0,2 мл использовали для посева на плотную среду Л-Й в контрольную пробирку без препаратов и на среду с лекарственными препаратами в разных концентрациях. Инкубировали посевы в термостате при температуре 37°С. Результат учитывали на 21 день после посева при обильном росте в контрольной пробирке. При скудном росте в контрольной пробирке все посевы оставляли еще на неделю в термостате до получения выраженного роста в контроле, после чего учитывали результат. Культуру считали чувствительной, если в пробирке со средой, содержащей лекарственный препарат, выросло менее 20 колоний и