Экспериментальное обоснование разработки и усовершенствования селективных питательных сред для диагностики листериоза

• Автор: Исаева, Роза Изитдиновна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 129 с. : 14 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СОКРАЩЕНИЯ ПО ТЕКСТУ ДИССЕРТАЦИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЛИСТЕРИОЗА. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Листерии и их роль в инфекционной патологии беременных и новорожденных

1.2. Современные методы микробиологической диагностики листериоза

1.3. Питательные среды для культивирования листерий

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Сырьё и реактивы
2.1.2. Штаммы микроорганизмов
2.1.3. Питательные среды
2.2. Методы
2.2.1. Физико-химические методы
2.2.2. Биологические методы
2.2.3. Методы статистической обработки результатов
ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАЗРАБОТКИ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ СЕЛЕКТИВНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛИСТЕРИОЗА
3.1. Определение оптимальных белковых гидролизатов, как основы питательных сред для выделения листерий
3.2. Разработка рецептуры сухой селективной питательной среды для выделения листерий
3.2.1. Изучение действия различных стимулирующих факторов
на рост листерий в экспериментальной среде
3.2.2. Определние действия селективных компонентов на рост микробов-ассоциантов в экспериментальной среде

3.2.3. Определение оптимальной буферной системы разработанной среды для селективного выделения листерий - САД-
3.2.4. Характеристика экспериментально-производственных серий сухой питательной среды для селективного выделения листерий -САЛ-
3.3. Разработка селективного агара для изоляции листерий из исследуемого материала различного происхождения
3.3.1. Усовершенствование рецептуры среды Оксфорд-агар для изоляции листерий из клинического материала и продуктов питания
3.3.2. Изучение стабильности сохранения свойств модифицированной среды САЛ-2 в процессе хранения
ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СРЕД САЛ-1 И САЛ-2 ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИСТЕРИЙ
4.1. Сравнительная характеристика показателей чувствительности и скорости роста разработанных сред САЛ-1 и САЛ-2 при выращивании бактерий рода Listeria
4.2. Оценка качества сред САЛ-1, САЛ-2 по показателям ингибиции микробов-ассоциантов и эффективности роста штаммов L.monocytogenes
в модельных опытах
4.3. Изучение ростовых свойств разработанных селективных сред для выделения листерий
ГЛАВА 5.0. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБОТАННЫХ СЕЛЕКТИВНЫХ СРЕД ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ БЕРЕМЕННЫХ И НОВОРОЖДЕННЫХ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

СОКРАЩЕНИЯ ПО ТЕКСТУ ДИССЕРТАЦИИ
АГВ - среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам ВУИ - внутриутробные инфекции
ВПГ - вирус простого герпеса
ИНИН - инфекции, передающиеся половым путем
МТС - микротест-система
МУК - методические указания
МЖК - муниципальная женская консультация
ОСО - отраслевой стандартный образец (мутности)
ПАБК - парааминобензойная кислота
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦ - перинатальный центр
РП - регламент производства
СПА - сухой питательный агар
СПБ - сухой питательный бульон
ТУ - техничекие условия
ФС - фармакопейная статья
ФСП - фармакопейная статья предприятия
ЦМВ - цитомегаловирус
ЭПР - экспериментально-производственный регламент
ЭКД - экстракт кормовых дрожжей

3912/41 (О 55:К 59), E.coli 124 К 72227, E.coli 168/59 (О 111: К 58), Е.соЫ АТСС 25922, E.coli 18, E.coli 06Р16, E.faecalis 775.
Штаммы сохраняли согласно существующим требованиям в лиофилизированном состоянии при тепературе (5±1)° С или на полужидком питательном агаре pH 7,6±0,1 под слоем стерильного вазелинового масла при температуре (5±1)°С. Пересевы производили через каждые 3 месяца.
Все штаммы были типичными и обладали характерными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами. В окрашенных по Граму мазках - L.monocytogenes грамположительные неспорообразующие полиморфные, чаще палочковидные бактерии длиной 0,5-2,0 мкм. На мясопептонном агаре на первые сутки роста L. monocytogenes образуют прозрачные мелкие колонии 0,2-0,5мм в диаметре, с зеленоголубым свечением и мелкозернистой структурой в косопроходящем свете.
2.1.3. Питательные среды. В работе использовали сухие питательные среды для выделения, накопления и идентификации микроорганизмов производства филиал ФГУП «НПО «Микроген» М3 и СР РФ НПО «Питательные среды» (г. Махачкала, Россия): СПА, СПБ, агар Эндо, Клебсиелла агар, среда Клиглера, Кандида агар, среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (АГВ), среды Гисса для определения биохимиической активности бактерий; среды для выделения, накопления и идентификации листерий, а также микротестситемы для изучения биохимических свойств бактерий - МТС-12Е, МТС-12 JI [39, 45, 46, 48].
В качестве сред сравнения были использованы: ПАЛКАМ агар и Оксфорд агар фирмы Biorad (Франция).
Для высева из среды накопления и для контроля чистоты выросшей культуры использовали питательный агар, сухой, по ФСП 42-0504-5807-04, питательный агар с 10% инактивированной сывороткой и 5% кровяной агар для изучения гемолитических свойств патогенных штаммов листерий.