Характеристики вируса гриппа, влияющие на показатели гуморального иммунного ответа в эксперименте и при вакцинации

• Автор: Федорова, Екатерина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 191 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Раздел 1. ВВЕДЕНИЕ

Раздел 2. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Вирус гриппа. Общие сведения

1.1.1 Строение вириона

1.1.2 Жизненный цикл вируса гриппа

1.2. Белки вируса грішна

1.2.1 Белки полимеразного комплекса (РВ2, РВ1, РА)

1.2.2 Поверхностные белки вируса гриппа - гемагглютшпш и ненраминидаза

1.2.3 Нуклеопротсин (№)
1.2.4 М1 и М2 белки
1.2.5 Неструктурные белки
1.3 Специфический иммунитет к вирусу гриппа и ЖГВ
1.3.1 Гуморальный иммунный ответ к вирусу гриппа и ЖГВ
1.3.2 Клеточный иммунный ответ к вирусам гриппа и ЖГВ
1.3.3 Методы оценки гуморального иммунного ответа на гриппозную инфекцию
1.3.4 Морская свинка как модель для изучения противогриппозного иммунитета
1.4 Свойства вируса гриппа, которые могут повлиять на иммуногенность гриппозных вакцин
1.4.1 Тсмпсратурочувствнтельность «диких» вирусов, сс возможные механизмы
1.4.2 Влияние (в-фенотипа «дикого» родительского вируса на иммуногенность вакцинных штаммов живой гриппозной вакцины
1.4.3 Ингнбнторочувствителыюсть «диких» вирусов, ее природа и возможные механизмы
1.4.4 Связь ингнбиторочувствительности с иммуногенностыо
1.4.5 Связь рецепторной специфичности с иммуногенностыо
1.5 Кодонная оптимизация как способ повышения иммуиогенности
1.5.1 Теоретические основы оптимизации кодонного состава
1.5.2 Использование метода изменения кодонного состава в разработке аттенуированных противовирусных вакцин
1.5.3 Повышение иммуногенности противовирусных вакцин путем оптимизации кодонного состава
1.6 Заключение к обзору литературы
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Вирусологические методы
2.2 Методы работы с лабораторными животными
2.3 Методы оценки показателей гуморального иммунного ответа
2.4 Молекулярно-биологические методы
2.5. Методы компьютерного моделирования

2.6 Методы статистической обработки
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Отработка модели для постановки опытов по исследованию показателен гуморального иммунного ответа на вирус гриппа
3.1.1 Сравнительный анализ патогенетических особенностей гриппозной и вакцинальной инфекций у морских свинок
3.1.2 Сравнение показателей гуморального иммунного ответа к холодоадаптированным штаммам вируса гриппа с дополнительными аттенуирующими мутациями во внутренних генах
3.1.3 Сравнение показателей гуморального иммунного ответа к холодоадаптированным штаммам вируса гриппа с одиночными кодирующими мутациями в гемагглютинине
3.1.4 Заключение
3.2 Влияние ннгнбнторочувствнтсльности штамма вируса гриппа на показатели гуморального иммунного ответа у морских свинок
3.2.1 Сравнение ингибитороустойчивого и ингибнторочувствительного вариантов вируса A/Singapore/1/57 (H2N2), имеющих аминокислотные замены в рецептор-связывающей области гемагглютшшна, в экспериментах in vitro и in vivo
3.2.2 Показатели гуморального иммунного ответа после заражения морских свинок вариантами вируса A/Singapore/1/57 (H2N2) в экспериментах in vivo
3.2.3 Характеристика 7:1 и 6:2 реассортантов, унаследовавших нейрамшшдазу от ИЧ или ИУ внруса-родителя
3.2.4 Показатели гуморального иммунного ответа после вакцинации морских свинок 7:1 и
6:2 реассортантамн на основе вируса гриппа A/Califomia/7/2004 (H3N2)
3.2.5 Показатели гуморального иммунного ответа после вакцинации морских свинок 7:1 и
6:2 реассортантамн на основе вируса гриппа B/Wisconsin/1/2
3.2.6 Заключение
3.3 Отдельные аминокислотные замены в молекуле гемагглютшшна и их влияние на показатели гу,морального иммунного ответа после иммунизации морских свинок вакцинными штаммами
3.3.1 Гетерогенность в аминокислотном составе гемагглютнннна популяции дикого вируса A/New Caledonia/20/99 (ГІINI) и реассортантов, полученных на его основе в развивающихся куриных эмбрионах и клетках MDCK
3.3.2 Картирование аминокислотных отличии в гемагглютинине клонов дикой популяции А/New Caledonia/20/99 (Н INI) и вакцинных реассортантов, подготовленных на их основе
3.3.3 Показатели гуморального иммунного ответа у морских свинок, вакцинированных штаммами, подготовленными на основе вариантов вируса A/New Caledonia/20/99 (H1N1), имеющих одиночные аминокислотные отличия в гемагглютинине
3.3.4 Заключение
3.4 Влияние оптимизации кодонного состава гемагглютнннна на свойства вирусов гриппа и показатели гуморального иммунного ответа в экспериментах in vivo
3.4.1 Характеристика вирусов H1N1 и H5N1 с измененным составом кодонов в гемагглютинине, использованных в работе
3.4.2 Фенотипические свойства вирусов H1N1 и H5N1 с измененным составом кодонов в гемагглютинине

3.4.3 Показатели гуморального иммунного ответа после введения вирусов НШ1 и Н5№ с
измененным составом кодонов в гемагглютинине в экспериментах ш vivo
3.4.4 Отработка методики получения вакцинных штаммов ЖГВ на основе штаммов для инактивированной вакцины (PR8 реассортантов)
3.4.5 Реассортация вирусов с кодон-оптимизированным гемагппотинином и холодоадаптнрованного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/
3.4.6 Заключение
3.5 Связь фенотипических признаков «диких» родительских вирусов с иммуногеиностыо вакцинных штаммов, подготовленных на их основе:
ретроспективный анализ данных клинических испытаний живой гриппозной вакцины

3.5.1 Влияние М-фенотипа «дикого» родительского вируса на иммуногенность вакцинных
штаммов живой гриппозной вакцины
3.5.2 Влияние ннгибиторочувствитсльности «дикого» родительского
3.5.3 Возможное влияние комбинации признаков чувствительности к ингибиторам и к температуре инкубации «дикого» родительского вируса на иммуногенность вакцинных штаммов ЖГВ
3.5.4 Возможное влияние комбинации признаков чувствительности к ингибиторам и к температуре инкубации «дикого» родительского вируса на выраженность клинических реакции при введении ЖГВ
3.5.5 Заключение
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Раздел 3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ:
Благодарность
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

В 1969 году была предложена классификация ингибиторов нормальной сыворотки и секретов животных с разделением на три класса: а- (3- и у-, в зависимости от тсрмостабилыюстн и чувствительности к нейраминидазе [186].
1 класс: а-ингибиторы - термостабильные гликопротеины, содержащие остатки опаловых кислот и связывающиеся с рецептор-связывающими областями головки гемагпнотшшна вируса гриппа, а-ингибиторы чувствительны к обработке нейраминидазой, трипсином, перйодатом и содержатся в сыворотках и секретах большинства животных.
2 класс: (3-ингибиторы представляют собой лсктины, взаимодействующие с компонентами вирусных оболочек. Нейтрализация вируса происходит путем связывания гемагглютиннна и активации каскада комплемента по лектин-зависимому пути. По классификации Кпгапоуа и Иабшуа (1969) [5-ингибиторы отнесены к термолабильным, но в статье Ма1го5оу1сЬ с соавт. (1998) показано, что по крайней мере часть из них устойчива к температуре. Ингибиторы этого класса не чувствительны к обработке нейрамшшдазой и перйодатом, могут быть удалены обработкой цитратом или трипсином. Они были обнаружены в сыворотках коров, мышей, кроликов, хорьков и морских свинок.
3 класс: у-ингибиторы являются температуроустойчивыми гликопротеинами, содержащими остатки спаловых кислот и устойчивыми к нейрамшшдазной активности. По данным Кпгапоуа, Лайюуа, (1969) при воздействии высокой температуры количество этих ингибиторов может увеличиваться. В качестве способа удаления этих ингибиторов описана только обработка перйодатом калия. Эти ингибиторы присутствуют у лошадей, морских свинок, кроликов, хорьков, свиней и человека.
Позднее эту классификацию расширяли другие исследователи в соответствии с новыми данными.
По современным представлениям, ингибиторы вируса гриппа можно разделить на две основные группы, содержание которых в сыворотках крови разных животных сильно различается - ингибиторы, мимикрирующие под рецептор вируса гриппа на клеточной поверхности, и ингибиторы, не содержащие сиаловых остатков.
1.4.3.1 Ингибиторы, мимикрирующие под рецептор вируса гриппа па клеточной поверхности и блокирующие рецентор-связывающий карман гемагглютиннна
Гемагглютинин вируса гриппа при проникновении в клетку хозяина взаимодействует с поверхностными олигосахаридами клеточной поверхности. Вирусы гриппа человека прикрепляются к олигосахаридам, содержащим 5-Ы-ацетилнейраминовую (сиаловую) кислоту, связанную с галактозой или глюкозамином а-2,6 связью. Вирусы гриппа птиц и лошадей предпочитают рецепторы с а-2,3 связью [279].