Разработка иммуноферментных тест-систем для выявления антител к рота- и коронавирусам крупного рогатого скота

• Автор: Скитович, Галина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АБТС - 2,2’-азино-ди[3-этил]бензотиазолинсульфоновая кислота АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин
ВГНКИ - Всероссийский Государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБУ «ВГНКИ»)
ИФА — иммуноферментный анализ
КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер
КГ-91 - перевиваемая линия культуры клеток гонад козы
КВ - коронавирус
КРС - крупный рогатый скот
ЛЭК - первично-трипсинизированная культура клеток легкого эмбриона коровы
МДВК - перевиваемая линия культуры клеток почки эмбриона коровы МПА - мясопептонный агар МПБ - мясопептонный бульон
Н-ИФА - непрямой вариант иммуноферментного анализа
ОК - оптическая плотность отрицательной контрольной сыворотки
ОП - оптическая плотность
ОС - относительная специфичность тест-системы
04 - относительная чувствительность тест-системы
ПК - оптическая плотность положительной контрольной сыворотки
ПНП - позитивно-негативный порог
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
ПЭК - первично-трипсинизированная культура клеток почки эмбриона коровы
РВ - ротавирус
РГА - реакция гемагглютинации
PH - реакция нейтрализации
РТГА - реакция торможения гемагглютинации

СПЭВ - перевиваемая линия культуры клеток почки эмбриона свиньи
ТБР - трис-буферный раствор рН-7,4-7
ТГС - тиогликолевая среда
ТЦЦ50/смз - 50% тканевая цитопатическая доза
ЦПД - цитопатическое действие
ЭМ - электронная микроскопия
МА-104 - перевиваемая линия культуры клеток почки эмбриона макаки резус Mark-145 - перевиваемая линия культуры клеток почки эмбриона макаки-резус, клон клеток МА
РК-15 - перевиваемая линия культуры клеток почки поросенка SDS - додецилсульфат натрия
VERO - перевиваемая линия культуры клеток почки африканской зеленой мартышки

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика семейства Reoviridae
1.1.1. Основные свойства ротавирусов
1.1.1.1. Структура вириона и физико-химические свойства
1.1.1.2. Структура генома и протеины
1.1.1.3. Репликация вирусного генома
1.1.2. Патогенез и эпизоотология
1.1.3. Выделение в культуре клеток
1.1.4. Особенности иммунитета при ротавирусной инфекции
1.1.5. Диагностика ротавирусной инфекции крупного рогатого скота
1.2. Характеристика семейства Coronaviridae
1.2.1. Структура вириона и физико-химические свойства
1.2.2. Патогенез и эпизоотология
1.2.3. Особенности иммунитета при коронавирусной инфекции
1.2.4. Диагностика коронавирусной инфекции крупного рогатого скота
1.3. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Материалы
2.1.2. Методы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Получение диагностического антигена ротавируса КРС
3.1.1. Выделение изолятов ротавируса КРС из проб патологического материала в перевиваемой культуре клеток
3.1.2. Подбор оптимального режима культивирования ротавируса КРС изолята «Меленки» в культуре клеток МДВК

отделов кишечника вызывает воспалительные процессы, гидролитический дисбаланс, приводящий к стойкому ацидозу, гликемии и летальному исходу [48, 110, 115, 120, 184]. При вскрытии основные изменения наблюдаются в желудочно- кишечном тракте: на слизистой оболочке ротовой полости, пищевода, сычуга, двенадцатиперстной кишки имеются язвы. Кишечник заполнен жидким, жёлто-зелёным содержимым, его стенки истончены, слизистая оболочка гиперемирована. Поражаются мезентеральные лимфатические узлы [120, 184].
Коронавирусная инфекция крупного рогатого скота причиняет большой экономический ущерб хозяйствам. Уровень заболеваемости телят достигает 100%, а смертности — до 50%. Экономические потери складываются не только из падежа животных и затрат на их лечение, но и из убытков, связанных с замедлением роста и развития животных [81].
1.2.3. Особенности иммунитета при коронавируснон инфекции
Защита против КВ диареи зависит от уровня вирусспецифических антител в кишечной полости. У неонатальных телят этот местный иммунитет приобретается пассивно, в форме антител, усвоенных из молозива и молока. Основным изотипом является иммуноглобулин 01, большей частью получаемый из сыворотки, путем селективного транспортного механизма действующего в молочной железе [76, 138]. Уровень специфических антител к КВ при молочной секреции во время родов очень высок, но потом резко падает [59, 154]. При заражении у телят вырабатывается активный
иммунитет к вирусу, и, вероятно, именно иммуноглобулины А, адсорбированные на поверхности слизистой, которые защищают животных от повторного заражения [102, 162]. Диарея, как правило, возникает если уровень колостральных антител падает до того, как вырабатывается активный иммунитет. Телята с низким титром антител в сыворотке и, следовательно, получившие молозиво и молоко с низким уровнем антител, особенно восприимчивы к инфекции. Наиболее подвержены риску