Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи

• Автор: Мотузова, Екатерина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 166 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ:

Введение

РАЗДЕЛ 1 Обзор литературы

Глава 1 Лабораторная диагностика кори и краснухи

1.1. Серологические методы диагностики кори и краснухи

1.2. Методы, применяемые за рубежом и в РФ для серодиагностики кори

и краснухи

1.3. Иммуноферментный анализ как метод диагностики кори и

краснухи
Глава 2 Роль ИФТС в период элиминации кори и краснухи и
проведение сравнительного анализа тест-систем в других странах
РАЗДЕЛ 2 Собственные исследования
Г лава 3 Материалы и методы
3.1. Материалы
3.2. Методы
3.2.1 Иммунохимические и серологические методы
3.2.2 Статистические методы
3.2.3 Оценка диагностической чувствительности и специфичности, прогностической ценности и аналитической
чувствительности иммупоферментных тест-систем
Глава 4 Аттестация отраслевого стандартного образца (ОСО) и
панелей сывороток (СПС и РГГП) для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи
4.1. Аттестация ОСО антител к вирусам кори и краснухи

4.2. Аттестация ОСО СПС, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори
4.2.1 Исследование специфической активности
4.3. Аттестация РПП, сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи
Глава 5 Регистрационная и пострегистрационная оценка качества
ИФТС «Корь-ДО-ДС»
Глава 6 Сравнительное изучение диагностической эффективности
ИФТС разных производителей для диагностики краснухи
6.1. Пострегистрационная оценка качества отечественных ИФТС, для выявления антител класса к вирусу краснухи
6.1.1 Изучение новых ИФТС для диагностики краснухи
6.2. Сравнительное изучение диагностической ценности отечественных ИФТС для выявления специфических антител класса к вирусу
краснухи
6.3. Изучение ИФТС для определения авидности антител класса к вирусу краснухи
Глава 7 Оценка возможности использования иммуноферментного
анализа (ИФА) для характеристики препаратов иммуноглобулина по содержанию антител класса 1цС к вирусу кори и краснухи
Глава 8 Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ
Список литературы
Приложение №1

ВВЕДЕНИЕ
Корь и краснуха - острые вирусные заболевания, имеющие большое социальное значение.
Всемирная организация здравоохранения относит эти инфекции к тем, которые могут быть ликвидированы с помощью активной иммунизации населения уже в первое десятилетие XXI века (98,121).
Российская Федерация участвует в Региональной программе ВОЗ по ликвидации кори, краснухи и предупреждения Синдрома врожденной краснухи (СВК) (3,23,34).
Поэтапная реализация программы ликвидации кори в РФ существенно изменила качественные и количественные характеристики эпидемического процесса этой инфекции. Если в довакцинальный период показатель заболеваемости корью в среднем составлял 933,2 на 100 тыс. населения, то в последние годы он снизился до спорадического уровня. В 2007 году показатель заболеваемости приблизился к критерию элиминации (менее 1 случая на 1 млн населения) и составил 0,12 на ЮОтыс населения (31). В 2008 году заболеваемость снизилась до 0,02 на 100 тыс. населения, за б мес. 2009г показатель заболеваемости корью на 100 тыс. населения составил 0,07.
Эпидемическое благополучие населения обеспечивается высоким охватом детей двукратной вакцинацией против кори, которая составляет по стране более 96%. Более чем на 70% территории страны случаи кори не регистрируются, на остальной части наблюдаются единичные случаи заболевания. Молекулярно- генетическое слежение за циркуляцией штаммов вируса говорит о прекращении трансмиссии вируса кори генотипа Б6, эндемичного для РФ (5).
В настоящее время программа ликвидации кори близка к завершению, однако для успешного выполнения всей программы в целом необходимо наличие отечественных высококачественных диагностических препаратов для выявления антител класса 1§М и к вирусу кори для своевременной

исследовании сывороток, содержащих защитный уровень антител, но низкую чувствительность или специфичность при исследовании других групп сывороток.
Таким образом, авторы продемонстрировали необходимость использования сывороток с различным содержанием антител к вирусу кори для оценки диагностической эффективности ИФТС.
Проведено изучение коммерческих ИФТС, определяющих индекс авидности антител класса IgG к вирусу краснухи: «Adaltis EIAgen» (Adaltis Italia), Италия; «Enzygnost Anti-Rubella Virus IgG avidity» (Dade Behring), Германия; «Diesse Enzywell» (Diesse Diagnostica Senese), Италия; «Euroimmun» (Libeck), Германия; «Radim EIA Well» (Radim SpA), Италия в сравнении с методом, разработанным Thomas и Morgan-Capner, который принят за золотой стандарт для определения индекса авидности антител класса IgG (103). Этот метод заключается в следующем; в две параллельные лунки планшета с адсорбированным антигеном вируса краснухи добавляется 50 мкл предварительно разведенной сыворотки пациента, вирусспецифичные антитела класса IgG в сыворотке связываются с антигеном. После инкубации в одну лунку вносят фосфатный буфер, в другую 35мМ дифениламина, который вызывает диссоциацию комплекса антиген-антитело, степень которой зависит от константы связывания антител с антигеном. Затем планшет промывают и в его лунки вносят козьи античеловеческие IgG антитела меченные пероксидазой хрена, необходимые для обнаружения антител в образце пациента. После инкубации и промывки планшета в него добавляют субстратный хромоген - ортофенилдиамин, для выявления присутствия вирус-специфических IgG в исследуемом образце. Реакцию останавливают добавлением серной кислоты. Индекс авидности рассчитывается как отношение оптической плотности лунки с сывороткой, обработанной дифениламином, к оптической плотности, полученной для этой же сыворотки без обработки ее денатурирующим агентом, умноженное на 100% (126,127).