Молекулярные механизмы холодоадаптации и реверсий к TS+фенотипу вирусов гриппа A и B

• Автор: Цфасман, Татьяна Михайловна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Живые противовирусные вакцины - проблемы и преимущества

1.1.1. Общая характеристика живых противовирусных вакцин

1.1.2. Проблемы, связанные с применением живых противовирусных вакцин

1.1.3. Способы улучшения живых противовирусных вакцин

1.2. Вирус гриппа: строение вириона и геном

1.3. Генетика вируса гриппа

1.3.1. Мутационная изменчивость
1.3.2. Рекомбинационная изменчивость
1.3.3. Экстрагенные и интрагенные супрессии
1.4. Живые холодоадаптированные гриппозные вакцины
1.4.1. Получение живых гриппозных вакцин
1.4.2. Механизмы аттенуации ХА штаммов-доноров для производства ЖГВ
1.4.3. Генетическая стабильность аттенуированных штаммов и вакцин, полученных на их основе
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Реактивы
2.1.2. Лабораторные штаммы вирусов
2.1.3. Клеточные линии и куриные эмбрионы
2.2. Методы

2.2.1. Работа с культурами клеток
2.2.2. Определение инфекционного титра вирусов в ЭИД50 и
накопление вирусов для последующих опытов
2.2.3. Получение ХА вариантов штаммов вируса гриппа А/Краснодар/101/59 и В/Виктория/2/
2.2.4. Получение ts+ ревертантов ХА штаммов вируса гриппа А (А/Краснодар/101/35/59 и А/Ленинград/134/47/57) и ХА штамма вируса гриппа В (В/Виктория/2/41/87)
2.2.5. Клонирование ХА штаммов и ts+ ревертантов ХА штамма А/Краснодар/101/35/59 методом бляшек
2.2.6. Оценка патогенности вирусов для мышей
2.2.7. Комплементационно-рекомбинационный тест
2.2.8. Очистка вируса и выделение вирионной РНК
2.2.9. Получение ПЦР-продуктов для последующего секвенирования
или ПЦР-рестрикционного анализа
2.2.10. ПЦР-рестрикционный метод
2.2.11. Очистка ПЦР-продуктов
2.2.12. Секвенирование
2.2.13. Статистическая обработка результатов опытов по оценке
патогенности вирусов для мышей
2.2.14. Компьютерное обеспечение
Глава 3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ АДАПТАЦИИ К
ПОНИЖЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ ВИРУСОВ ГРИППА А И В НА МОДЕЛИ ХА МУТАНТОВ ШТАММОВ А/КРАСНОДАР/101/59 И В/ВИКТОРИЯ/2/

3.1. Биологические свойства и мутации в геноме ХА штамма А/Краснодар/101 /35/59(Н2Ы2) - потомка эпидемического штамма
А/Краснодар/101/
3.2. Биологические свойства и мутации в геноме ХА вариантов штамма В/Виктория/2/
Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ РЕВЕРСИЙ ХА ШТАММОВ К (э+ ФЕНОТИПУ
4.1. Получение и биологические свойства А+ ревертанта ХА штамма А/Ленинград/134/47/
4.2. Получение и биологические свойства ts+ ревертантов ХА штамма АЛСраснодар/101/35/
4.3. Получение и биологические свойства ts+ ревертанта ХА штамма В/Виктория/2/41/
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

1.3. Генетика вируса гриппа.
Эволюция вирусов гриппа обусловлена двумя процессами — накоплением мутаций в вирусных белках и реассортацией между различными штаммами. Быстрое накопление мутаций связано с ошибочными вставками нуклеотидов РНК-полимеразой вируса в процессе репликации вирусного генома, которое усугубляется отсутствием корректирующей активности у вирусной РНК-полимеразы. Реассортация — явление, связанное с сегментированностыо генома вируса гриппа. При совместной инфекции одной и той же клетки двумя различными штаммами возможно образование реассортантов — штаммов со смешанным набором РНК-сегментов в геноме.
Большая часть возникающих мутантов и реассортантов вируса гриппа менее жизнеспособны, чем родительские штаммы. Однако в определённых условиях - адаптация к новому хозяину, уход вируса от иммунного ответа — новые штаммы могут получить селективное преимущество [Александрова и Климов, 1994].
С этим связаны такие явления в эволюции вируса гриппа, как антигенный дрейф и антигенный сдвиг: способность избегать
нейтрализующего действия антител путём постепенного накопления мутаций в поверхностных белках вирионов (гемагглютинине и нейраминидазе) или путём реассортации со штаммом, имеющим иные антигенные свойства, соответственно.
Антигенный дрейф — постепенный процесс, который в конечном итоге может привести к появлению нового варианта вируса гриппа А или В, полностью нечувствительного к антителам к исходному штамму.
Антигенный сдвиг свойственен только вирусу гриппа А, характеризуется полной неспособностью антител против предкового штамма нейтрализовывать вирионы штаммов-потомков и связан с введением в