Мониторинг циркуляции вирусов гриппа в регионах России в 2006-2010 гг.

• Автор: Трушакова, Светлана Викторовна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 167 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ГЕНОМА ВИРУСОВ ГРИППА

El. Классификация вирусов гриппа, морфология, структура и функции генома.. Л

1.2. Структура и свойства поверхностных вирионных белков: (НА и NA)

1.3. Структура и свойства внутренних вирионных белков

1.3.1. Матриксный белок (М1) и мембранный белок (М2), нуклеопротеин(ЦР)

1.3.2. Внутренние белки вируса гриппа (РВ2,РВ1,РА, PB1-F2) и

неструктурные белки (NSI, NS2)
ГЛАВА 2. ОСОБЕННОСТИ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА ПРИ ГРИППЕ
2.1. Факторы, обусловливающие изменчивость вирусов гриппа
2.2. Рецепторная специфичность вирусов гриппа
2.3. Эпидемии и пандемии гриппа XX века
2.4. Циркуляция и антигенные свойства вирусов гриппа на рубеже XX-XXI веков.
2.5. Инфицирование людей вирусами гриппа птиц
2.6. Инфицирование людей вирусами гриппа свиней. Начало пандемии XXI века
ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ ПРОТИВОГРИППОЗНОГО ИММУНИТЕТА
3.1. Характеристика постинфекционного иммунитета
3.2. Популяционный иммунитет населения к вирусам, как показатель интенсивности циркуляции вирусов
ГЛАВА 4. МЕТОДЫ ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСОВ ГРИППА
4.1. Классические методы диагностики
4.2. Методы индикации антигенов вирусов гриппа и антител к ним
4.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
4.3.1. ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации
в агарозном геле
4.3.2. ПЦР с флуоресцентной детекцией продуктов амплификации
в режиме реального времени
4.3.3. Коммерческие тесты на основе ПЦР для диагностики гриппа
4.4. Применение ДНК-микрочипов в диагностике гриппа
4.5. Использование поверхностного плазмонного резонанса в диагностике
гриппа
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И НАБЛЮДЕНИЯ
ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Эпидемические, пандемические и эталонные штаммы
1.2. Клеточные линии
1.3. Носоглоточные смывы
1.4. Сыворотки доноров
1.5. Сиалилолигосахариды
1.6. Наборы реактивов и тест-системы ПЦР
1.7. Сорбенты
1.8. Стандартные методики, использованные в работе
1.8.1. Изоляция и культивирование вирусов в КЭ
1.8.2. Культивирование вирусов на культуре клеток MDCK
1.8.3. Реакция гемагглютинации (РГА)
1.8.4. Получение иммунных сывороток к вирусам гриппа
1.8.5. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
1.8.6. Определение термочувствительности поверхностного белка НА
1.8.7. Изучение рецепторной специфичности НА
1.8.8. Получение очищенных препаратов вирусов гриппа дифференциальным центрифугированием
1.8.9. Определение специфических антител к современным вирусам гриппа
у доноров
1.8.10. Выделение вирусных нуклеиновых кислот
1.8.11. Проведение реакции обратной транскрипции (ОТ)
1.8.12. Проведение полимеразной цепной реакции
1.8.13. Электрофорез кДНК в агарозном геле
1.8.14. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
1.8.15.Секвенировани е
1.8.16.Статистическая обработка серологических данных
1.8.17. Поверхностный плазмонный резонанс
ГЛАВА 2. ЭВОЛЮЦИЯ ВИРУСОВ ГРИППА А И В, ЦИРКУЛИРОВАВШИХ В РОССИИ В ПЕРИОД 2006-20 Югг
2.1. Антигенные свойства вирусов гриппа А и В, циркулировавших в
России с 2006г. по 2010г
2.2. Биологические свойства эпидемических штаммов вирусов гриппа,
изолированных в период с 2006 г. по 2009 г
2.2.1. Чувствительность систем изоляции культуры клеток MDCK и КЭ к современным эпидемическим штаммам вирусов гриппа
2.2.2. Чувствительность эритроцитов человека и кур к эпидемическим штаммам вирусов гриппа
2.2.3. Влияние температурного воздействия на активность поверхностного белка НА эпидемических штаммов вирусов гриппа
2.3. Состояние популяционного иммунитета населения к эпидемическим штаммам вирусов гриппа А и В в зависимости от периода эпидемического цикла

2.3.1. Сравнительные исследования популяционного иммунитета к вирусам гриппа А и В населения Приморского края и Еврейского автономного округа России в октябре 2006гт
2.3.2.Состояние популяционного иммунитета к современным эпидемическим штаммам вирусов гриппа А и В с 2006 г. по 2009 г. у населения (доноров)
г.Москвы и Московской области
ГЛАВАЗ. ОСОБЕННОСТИ ПАНДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА В РОССИИ
3.1. Выявление первых случаев заболевания, вызванного вирусом гриппа А(НШ1)у подобного свиному
3.2. Развитие пандемии на основе анализа материалов от больных методом ПЦР в течение 2009-2010гг
3.3. Антигенные свойства пандемических штаммов вирусов гриппа А(НШ1)у, циркулировавших в России в 2009-20 Югг
3.4. Биологические свойства пандемических штаммов вирусов гриппа А(НШ1)у, изолированных в России в период с 2009 по 20 Югг
3.5. Состояние популяционного иммунитета к пандемическим штаммам вирусов гриппа А(НШ1)у у населения (доноров) г.Москвы и Московской области в период
2009-20 Югг
ГЛАВА 4. ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ГРИППОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
4.1. Тест-система Нарвак
4.2. Тест-системы АмплиСенс
4.3. Тест-система МультиРесп
4.4. Тест-системы ДНК-технология
4.5. Использование иммунносорбции и поверхностного плазмонного резонанса для детекции белков вирусов гриппа в растворах
4.5.1. Сорбция к ДНК на полианилинсодержащие сорбенты
4.5.2. Определение кДНК и комплексов антиген-антитело вирусов гриппа в
растворах методом поверхностного плазмонного резонанса
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

немолекулярные, которые исследуют вирусные антигены и антитела (Vemet, 2004; Ginocchio, 2007; Kesson, 2007).
Классическим вирусологическим методом диагностики является первичное выделение и культивирование вируса гриппа из секретов верхних дыхательных путей или другого материала посредством заражения куриных эмбрионов, предложенное Барнетом (1936). Этот метод наиболее широко был распространен до середины 90-х годов XX века и являлся более доступным и чувствительным, чем заражение лабораторных животных. Ввиду изменения свойств вируса гриппа в процессе эволюции и увеличения тропизма к тканям млекопитающих, метод выделения на клетках культуры тканей животных стал одним из основных методов для выделения вируса гриппа (Бурцева и др., 2001). Наиболее часто используется культура клеток почек собаки породы спаниель MDCK. Кроме того, для культивирования вирусов гриппа также используются клетки почки зеленой мартышки VERO (Kaverin et al, 1995, 1996). Индикацию выделенного вируса проводят с помощью реакции гемагглютинации (РГА). Идентификацию выделенного вируса выполняют с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с антисыворотками к эталшшым штаммам вируса гриппа. РТГА позволяет определить антигенную структуру поверхностных белков и дифференцировать различные штаммы вируса гриппа А и В с разными подтипами гемагглютинина.
Серологические тесты включают реакцию связывание комплемента (РСК), реакцию торможение гемагглютинации (РТГА), реакцию биологической нейтрализации (РБН) и иммуноферментный анализ (ИФА). Наиболее распространенным продолжает оставаться метод РТГА, его проводят с помощью сравнительного определения содержания противогриппозных антител в двух пробах крови, взятых в начале болезни и в период выздоровления больного с интервалом не менее 8-14 дней. Диагноз гриппа подтверждается при выявлении прироста антител (по их титру) во второй сыворотке в 4 и более раз.
4.2. Методы индикации антигенов вирусов гриппа и антител к ним
Быстрая диагностика вирусных заболеваний до сих пор является актуальной проблемой. Одним из способов ее решения является создание иммунохимических тест-систем, позволяющих проводить индикацию вируса с помощью поликлональных или моноклональных антител к вирионным белкам.
Метод иммуннофлюоресценции (ИФ) является высокоспецифическим и позволяет диагностировать и дифференцировать грипп. Применяют прямой и непрямой методы иммунофлюоресценции. Методом ИФ можно определить только серологический тип вируса гриппа, а не штаммовую принадлежность, так как в реакции участвует общий типоспецифический гриппозный антиген (Биргер, 1982).