Дифференциация вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе анализа геномов

• Автор: Аронова, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 144 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1 Актуальность
1.2. Степень разработанности проблемы
1.3 Цели и задачи исследования
1.4 Научная новизна работы
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы
1.6 Публикация результатов исследований
1.7 Степень достоверности и апробация работы
1.8 Соответствие содержания диссертации паспорту специальности, по которой она рекомендуется к защите
1.9 Структура и объём диссертационной работы
1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1.11 Личный вклад автора в выполнение работы
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Краткая характеристика вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки
2.1.1 Краткая характеристика вируса эпизоотической геморрагической 17 болезни оленей
2.1.2 Краткая характеристика вируса болезни Ибараки
2.2 Источники и пути передачи орбивирусных инфекций
2.3 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки в мире
2.3.1 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей в мире
2.3.2 Эпизоотическая ситуация по болезни Ибараки в мире
2.4 Строение вирионов вирусов эпизоотической геморрагической бо-

лезни оленей
2.4.1 Морфология и химический состав вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки
2.4.2 Строение геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки
2.5 Использование полимеразной цепной реакции для обнаружения геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки
2.6 Изучение нуклеотидного состава и филогенетический анализ геномов штаммов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей
2.7 Заключение по обзору литературы
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы
3.1.1 Вирусы
3.1.2 Животные
3.1.3 Культуры клеток
3.1.4 Кровь и сыворотки
3.1.5 Плазмида и бактериальные штаммы
3.1.6 Реактивы
3.1.7 Лабораторное оборудование
3.2 Методы
3.2.1 Выделение рибонуклеиновой кислоты
3.2.2 Постановка реакции обратной транскрипции
3.2.3 Постановка полимеразной цепной реакции с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени
3.2.4 Постановка классического варианта полимеразной цепной реакции

3.2.5 Проведение электрофореза
3.2.6 Нуклеотидное секвенирование
3.2.7 Филогенетический анализ
3.2.8 Клонирование продуктов полимеразной цепной реакции
3.2.9 Искусственное заражение животных
3.2.10 Заражение эмбрионов кур
3.2.11 Исследование проб сывороток крови от заражённого пятнистого оленя в реакции нейтрализации
3.2.12 Программное обеспечение и интернет-ресурсы
3.2.13 Критерии оценки разработанных тест-систем
3.2.14 Статистическая обработка результатов исследований
3.3 Результаты собственных исследований
3.3.1 Разработка тест-системы для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
3.3.2 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации к тест-системе для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
3.3.3 Разработка тест-системы для выявления геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки на основе мультиплексного варианта полимеразной цепной реакции
в режиме реального времени
3.3.4 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации комплементарной дезоксирибонуклеиновой кислоты вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей к тест-системе для выявления геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки на основе мультиплексного ва-

ГЬЦр://ут^о1елЩ/шаЫ5/риЬНс.р1щ?раее=зта1е герой&рощЧ &герогЦсП9643]. Сообщений о дальнейшем распространении инфекции с указанной территории не поступало.
ЭГБО в Казахстане. В ходе серологических исследований, проведённых в 1997 - 1998 гг. в Центральном Казахстане, были обнаружены антитела к вирусам ЭГБО и блютанга в образцах сывороток от КРС и мелких жвачных. На основании полученных результатов был сделан вывод о присутствии ЭГБО и блютанга в Казахстане. Возможно, что указанные вирусы уже являются эндемиками для этой территории и существует опасность их заноса в южные и восточные регионы России [ЬипйегуоИ, М., 2004].
Мониторинг ЭГБО на территории РФ. Используя данные о распространении мокрецов на территории РФ и показатель среднегодовой суммы эффективных температур сотрудники ВНИИВВиМ в 2003 г. установили потенциальный нозоареал распространения ВЭГБО на территории нашей страны. В результате внутри РФ было выделено 4 зоны риска обнаружения ЭГБО (У-УШ). В состав зон с наиболее высокой вероятностью обнаружения ЭГБО (V и VI зоны) вошли: Северный Кавказ, Нижнее Поволжье, Приморский край, Уральский и Западно-Сибирский районы, находящиеся в субтропическом и умеренном климатических поясах, включающих ландшафтные зоны лесную, лесостепную, а также зоны степей и полупустынь [Чичикин, А.Ю., 2002].
С учётом составленного районирования в 1991 г. был проведен серологический мониторинг болезни в регионах с максимальной степенью напряженности предпосылок её возникновения. В результате исследования проб сывороток крови, отобранных от КРС и пятнистых оленей в Закавказье и Краснодарском крае, был получен отрицательный результат. В пробах сывороток крови от пятнистых оленей и овец, обитающих на территории республик Тыва, Бурятия, Алтайского и Приморского краёв, обнаружили специфические к вирусу ЭГБО антитела в титре 1:4-1:8, что свидетельствовало о возможной циркуляции вируса в популяции этих животных. Позднее в данных