Разработка и использование препаратов растительного происхождения в технологиях создания гриппозных вакцин

• Автор: Мазуркова, Наталья Алексеевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 305 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Главы

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Гриппозные вакцины в современном арсенале

иммунопрофилактики

1.1.1. Инактивированные гриппозные вакцины

1.1.2. Живые аттенуированные гриппозные вакцины

1.2. Эффективность и объемы современного производства

гриппозных вакцин
1.3. Подходы к созданию гриппозных вакцин нового поколения
1.3.1. Рекомбинантные вакцины
1.3.2. ДНК-вакцины
1.3.3. Растительные вакцины
1.3.4. Синтетические вакцины на основе пептидов
1.3.4.1. Вакцины на основе консервативных последовательностей
протеинов М2е и № вируса гриппа
1.3.4.2. Вакцины на основе консервативных последовательностей
протеина НА
1.3.4.3. Вакцины на основе комбинаций вариабельных и консервативных
эпитопов различных протеинов вируса гриппа
1.4. Культуральные гриппозные вакцины
1.4.1. Клеточные линии в качестве субстрата культуральных
гриппозных вакцин
1.4.2. Инактивированные культуральные гриппозные вакцины
1.4.3. Живые культуральные гриппозные вакцины
1.4.4. Питательные среды, ферменты, стабилизаторы, используемые
при производстве культуральных гриппозных вакцин
1.5. Адъюванты для повышения иммуногенности гриппозных вакцин
1.6. Иммуномодуляторы, используемые для повышения
эффективности гриппозных вакцин
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Методы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка технологии приготовления питательной среды
на основе соевого гидролизата
3.1.1. Конструирование питательной среды на основе соевого
гидролизата, полученного с использованием бромелаина, для перевиваемых линий клеток МНСК и Уего
3.1.2. Изучение влияния экспериментальных питательных сред на биологические свойства перевиваемых линий клеток МОСК. и

3.1.2.1.
3.1.2.2.

3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.3.1.
3.2.3.2.
3.2.4.
3.2.5.
3.2.6.
3.2.6.1.
3.2.6.2.
Изучение пролиферативных, морфологических и кариологических характеристик перевиваемых линий клеток MDCK и Vero при культивировании в экспериментальных питательных средах
Контроль контаминации перевиваемых линий клеток MDCK и Vero при культивировании в экспериментальных питательных средах
Оценка возможности использования питательных сред на основе растительных компонентов для выращивания вакцинных штаммов вируса гриппа в перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero
Исследование репродукции вакцинных штаммов для изготовления инактивированной гриппозной вакцины на перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero, выращенных в экспериментальных питательных средах
Исследование репродукции вакцинных штаммов для изготовления живой гриппозной вакцины на перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero, выращенных в экспериментальных питательных средах
Изучение влияния ферментов растительного происхождения на репродуктивную активность вакцинных штаммов вируса гриппа в перевиваемых линиях клеток
Изучение возможности замены трипсина на растительные протеазы папайи и бромелаин при культивировании вакцинных штаммов вируса гриппа в клетках MDGK
Оценка возможности применения растительных протеаз для культивирования вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 в перевиваемых линиях клеток MDCKnVero
Оценка наработки вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 в перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero при использовании растительных препаратов
Ультраструктурные характеристики репликации вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 в перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero при использовании растительных препаратов
Фенотипическая и генетическая стабильность холодоадаптированных реассортантных вакцинных штаммов вируса гриппа при культивировании на клеточных линиях MDCK и.Vero с использованием растительных препаратов
Определение фенотипических признаков са%5 и ts'.(0 реассортантных вакцинных штаммов вируса гриппа A/H1N1,
A/H3N2 и В
Оценка фенотипической и генетической стабильности вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 при культивировании на клеточных линиях MDCK и Vero с

3.5.1.
3.5.2.

использованием растительных препаратов Изучение особенностей культивирования клеточных линий МИСК и Уего в экспериментальных питательных средах в роллерах
Изучение особенностей культивирования вакцинных штаммов вируса гриппа, используемых для производства инактивированной вакцины, в роллерах с использованием растительных препаратов
Изучение особенностей культивирования вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потс дам/86/92 в роллерах с использованием растительных препаратов Изучение особенностей культивирования вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 в роллерах на клеточных линиях КГОСК и Уего с использованием растительных препаратов Изучение влияния растительных препаратов на генетическую и фенотическую стабильность полученного в роллерах на клеточных линиях МБСК и Уего вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 Изучение возможности использования растительных компонентов в составе защитных сред при сублимационном высушивании полученного в перевиваемых клеточных линиях вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/
Изучение иммуногенности и протективной активности на лабораторных животных сухих вакцинных образцов, содержащих штамм вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92, приготовленных с использованием растительных препаратов Изучение изменений иммунного ответа лабораторных животных на пептид-бел ковые конъюгаты под влиянием пептидогликана растительного происхождения Иммуномакс ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ

была угроза эпидемии «птичьего» гриппа. В связи с подготовкой к пандемии гриппа значительно возрос спрос на вакцины, составляющий, по данным ВОЗ, от 2 до 3 млрд. доз в год. В условиях пандемии гриппа потребность в вакцинах в России составит 100 млн. доз. Такое производство с использованием традиционного субстрата быстро (к сезону и, тем более, к началу пандемии) развернуть невозможно. Кроме этого, вопросы качества гриппозных вакцин, как для России, так и всего мира остаются наиболее важными и зависят от быстроты освоения новых технологий. Из вышесказанного однозначно следует необходимость использования новых достижений биотехнологии в производстве гриппозных вакцин.
1.3. Подходы к созданию гриппозных вакцин нового поколения
Главным стимулом разработки новых подходов при конструировании вакцин явилась острая потребность в вакцинных препаратах против таких возбудителей, как хламидии и плазмодии, вирусы иммунодефицита человека (ВИЧ) и гриппа. Вакцины, созданные с применением традиционных подходов, не приносили желаемых результатов. Новейшие технологии разработки вакцин основаны на трех основных принципах: создание синтетических олигопептидов и полипептидов [311, 320], получение антиидиотипических антител [340] и манипуляции с ДНК [170, 272, 427]. В медицинскую практику в среднем каждые 1-2 года внедряется по одной новой вакцине и несколько модифицированных.
Несовершенство гриппозных вакцин, полученных на куриных эмбрионах, диктует необходимость использовать другие технологии: рекомбинантные вакцины на основе вирусных структурных протеинов, включая основанные на рекомбинантных протеинах или синтетических пептидах [222], вирусных векторах, кодирующих антигены вируса гриппа [271], ДНК-вакцины [136] и виросомальные вакцины с вирусо-подобными частицами (УЪРб), содержащие протеины НА и ИА [181]. Необходима разработка новых универсальных гриппозных вакцин, которые могли бы обеспечить требующийся кросс-кладовый протективный иммунитет [87, 153, 382, 465].