Разработка биопрепарата и бактериологической тест-системы для типирования Bordetella Bronchiseptica

• Автор: Сверкалова, Дарья Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.01.06, 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 175 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение бордетеллёза

1.2. Эпизоотологическая характеристика

1.3. Характеристика возбудителя Bordetella bronchiseptica

1.4. Патогенез бордетеллеза домашних животных

1.5. Клиническая картина и патологоанатомические изменения

1.6. Диагностика

1.7. Лечебно-профилактические мероприятия при бордетеллёзе

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Материалы
2.1.2. Методы
2.2 Результаты собственных исследований и их обсуждение
2.2.1 Изучение биологических свойств бордетелл
2.2.1.1. Морфология В. bronchiseptica
2.2.1.2. Изучение культуральных свойств бордетелл
2.2.1.3. Изучение биохимических свойств Bordetella bronchiseptica
2.2.1.4. Гемолитические свойства Л. bronchiseptica
2.2.1.5. Изучение предела возможности роста бордетелл при разных
показателях pH среды
2.3. Конструирование селективно-диагностической среды для Bordetella bronchiseptica
2.3.1. Подбор питательной основы для культивирования Bordetella bronchiseptica
2.3.2. Подбор селективного компонента для В. bronchiseptica
2.3.2.1.Изучение чувствительности В. bronchiseptica к химиотерапевтическим препаратам
2.3.2.2. Определение предельных концентраций мочевины и хлорида бария в субстрате для В. bronchiseptica
2.3.2.3. Определение предельных концентраций индикаторов в субстрате для В. bronchiseptica для определнния возможности их использования в качестве селективных компонентов
2.4. Конструирование селективно-диагностической среды Bordetella bronchiseptica
2.5. Определения качества экспериментальной дифференциальнодиагностической среды УГСХА BBR
2.5.1. Определение продуктивности среды
2.5.2. Эффективность экспериментальной дифференциально-диагностической среды УГСХА BBR
2.6. Разработка бактериальных методов индикации и идентификации бактерий рода Bordetella bronchiseptica от домашних животных
2.6.1. Разработка схемы выделения Bordetella bronchiseptica
2.6.2. Разработка методики выделения Bordetella bronchiseptica от животных
2.6.3. Конструирование биопрепарата для антигенной идентификации бактерий
Bordetella bronchiseptica
2.6.3.1. Получение гипериммунной сыворотки
2.6.4. Постановка серологической реакции агглютинации (РА) для антигенной идентификации Bordetella bronchiseptica
2.7. Мониторинг заболеваемости бордетеллезом собак и кошек в городе Ульяновске и апробация схем выделения и селективно-диагностической среды
для выделения и типирования Bordetella bronchiseptica
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
20 API - система идентификации бактерий
API NFT - система идентификации бактерий
BBR - Bordetella bronchiseptica
CAV-1 и CAV-2 - аденовирусы
NAD - никотинамид-дифосопиридиннуклеотид
NAG - N-ацетилглюкозамин пентапептидный остаток пептидогликанов синтезируются в цитоплазме микробной клетки и транспортируются через цитоплазматическую мембрану.
NAM - N-ацетилмураминовой кислоты пентапептидный остаток пептидогликанов синтезируются в цитоплазме микробной клетки и транспортируются через цитоплазматическую мембрану.
SDS - (додецилсульфат натрия) детергент, разрушающий нативную структуру клетки
Vitek AMS - система идентификации бактерий
ME - международные единицы
МПА - мясопептонный агар
МПБ - мясопептонный бульон
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РВР - penicillin-binding proteins "пенициллинсвязывающие белки" энзимы, находящиеся в цитоплазматической мембране РДП - реакция диффузной преципитации РИД Реакция иммунодиффузии РИФ - реакция иммунной флюоресценции ФВК - фосфорно-фольфрамовая кислота ЧП - чашка Петри

ции, достигнутой в сыворотке (Е. Bergogne-Berezin, 1994). Цефалоспорины третьего поколения уже могут играть важную роль в лечении респираторных болезней. Однако, несмотря на высокую активность против некоторых грам-отрицательных патогенов, цефтиофур-натрий и некоторые другие цефалоспорины третьего поколения не активны против В. bronchiseptica (R.J. Yancey et al., 1987).
Ципрофлоксацин и офлоксацин эффективны при введении внутривенно или в высоких дозировках. Эффективность кларитромицина и азитромицина против В. bronchiseptica делает их приемлемой альтернативой тетрациклину при лечении молодых собак с заболеваниями дыхательного тракта.
Цефалоспорины, особенно энрофлоксацин и ципрофлоксацин, блокируют репликацию ДНК бактерий, подавляя фермент ДНК-гидразу. Эти вещества достигают высокой концентрации в тканях и респираторном тракте (М Scheer, 1987; Е. Bergogne-Berezin, 1994;). Однако только 4 из 7 (57%) выделенных изо-лятов В bronchiseptica in vitro были восприимчивы к энрофлоксацину (J.C. Angus, 1997). Поэтому при использовании лекарственных препаратов против устойчивых бактерий, должны использовать после пробы на антибиотикочуст-вительность, а клиницисты должны придерживаться оптимальной рекомендуемой дозы (J.S. Wolfson, 1989;//. Lode, 1994).
Для лечения кошек подходят тетрациклин и энрофлоксацин в рекомендуемых дозах. Исследования показали, что, несмотря на высокую восприимчивость в рекомендуемых дозах доксициллина in vitro, у экспериментально зараженных кошек после его применения клинические признаки бронхосептикоза не исчезали (A.J. Coûts et al., 1996).
Антибиотикотерапия в начальной (катаральной) стадии инфекции профи-лактирует развитие или снижает тяжесть симптомов болезни, а в последующем - секундарных бактериальных инфекций. Кроме того, она предотвращает возникновение бактерионосительства. Наибольший терапевтический эффект даёт комплексное применение антибиотиков с сульфаниламидными препаратами.