Выделение и характеристика мультипотентных мезенхимных стволовых клеток крупного рогатого скота

• Автор: Викторова, Екатерина Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 144 с. : ил.

Содержание.

Список сокращений

Введение

1.Обзор литературы

1.1. Открытие стволовых клеток взрослого организма

1.2. Характеристика стволовых клеток взрослого организма

1.2.1. Потентность к дифференцировке стволовых клеток взрослого организма

1.2.2. Проблемы стандартизации стволовых клеток взрослого рганизма

1.2.3. Иммуиофенотип ММСК

1.3. Основные этапы выделения ММСК костного мозга и жировой

ткани
1.4 Функции и потенциальное применение ММСК в ветеринарной
медицине
1.5. Использование ММСК в
вирусологии
1.5.1 Актуальность использования ММСК в вирусологии
1.5.2. Цитопатогенное действие вирусов в культурах клеток
1.5.2.1. Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
(ИРТ)
1.5.2.2. Герпес вирус крупного рогатого скота - 4 типа (ВНУ-4)
1.5.2.3. Вирус парагриппа (ПГ-3)
1.5.2.4. Вирус ринопневмонии лошадей (РПЛ)
1.5.2.5. Вирус диареи-болезни слизистых (ВД-БС)
1.5.2.6. Вирус энцефаломиокардита мышей (ЕМС)
1.6. Заключение литературного анализа
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследований
2.1.1. Культуральная посуда
2.1.2. Приборы и оборудования
2.1.3. Специальные среды и растворы
2.1.4. Методы исследований
2.1.4.1 Методы выделения ММСК костного мозга КРС и их культивирование
2.1.4.2. Методы выделения ММСК из жировой ткани КРС и их
культивирование
2.1.4.3 Методы изучения свойств и признаков ММСК, выделенных из КМ и ЖТ КРС in vitro
2.1.4.4. Методы изучения направленной дифференцировки ММСК, выделенные из костного мозга и жировой ткани in vitro
2.1.4.5. Молекулярный анализ не дифференцированных клеток ММСК костного мозга и жировой ткани методом иммуноферментного анализа
2.1.4.6. Молекулярный анализ не дифференцированных клеток ММСК костного мозга и жировой ткани методом полимеразной цепной реакцией с гибридизационно-флуорисцентной детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ)
2.1.4.7. Методы изучения чувствительности культур ММСК КМ КРС и ММСК ЖТ КРС к вирусам
животных
2.1.4.8. Депонирование культур ММСК КМ КРС и ММСК ЖТ КРС
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Оптимизация и разработка методов выделение ММСК из КМ и ЖТ
2.2.1.1. Получение пункций КМ КРС для последующего выделения ММСК
2.2.1.2. Получение пункций ЖТ КРС для последующего выделения ММСК

2.2.1.3. Выделение ММСК из костного мозга КРС
2.2.1.4. Выделение ММСК из жировой ткани КРС
2.3. Свойства и признаки ММСК, выделенных из КМ и ЖТ КРС
2.3.1 Культивирование ММСК, выделенных из КМ и ЖТ КРС
2.3.2. Морфологические признаки ММСК, выделенных из КМ КРС
2.3.3. Морфологические признаки ММСК, выделенные из ЖТ КРС
2.3.4. Способность ММСК КМ КРС и ММСК ЖТ КРС к формированию колоний in vitro митотический индекс и клеточный цикл
2.3.5. Определение иммунофенотипа ММСК, выделенных из КМ и ЖТ КРС
2.3.5.1. Анализ экспрессии поверхностных Аг - маркеров фенотипа ММСК на клетках, выделенных из КМ и ЖТ

2.3.5.2. Молекулярный анализ не дифференцированных клеток ММСК КМ!и ЖТ методом полимеразной цепной реакцией с гибридизационно-флуорисцентной детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ)
2.4. Индукция ММСК, выделенных из КМ и ЖТ КРС к дифференцировав клетки костной и жировой тканей
2.5. Оценка чувствительности культур ММСК КРС КМ КРС и ММСК ЖТ КРС к вирусам
животных
2.5.1. Оценка чувствительности ММСК, выделенные из КМ КРС к
вирусам
2.5.2.Оценка чувствительности культуры ММСК ЖТ КРС к
вирусам
2.5.3. Определение вирусного титра в культурах ММСК КМ КРС и ММСК ЖТ КРС

США, в 1946 году при вспышках острой, часто со смертельным исходом, болезни КРС, характеризующейся диареей и эрозийными поражениями пищеварительного тракта [126, 144].
Это РМК-содержащий вирус, представлен двумя биотипами: нецитопатогенным (ЦГ1Д‘) и цитопатогеиным (ЦПД+), взаимодействие которых в организме животных определяет клиническую картину заболевания - от персистентной, хронической формы, до острой с неизбежным смертельным исходом. Ни у одного из штаммов ВД-БС и в целом у представителей рода Pestivirus не установлена гемагглютинирующая активность.
Основной моделью для репродукции ЦПД+ штаммов вируса являются чувствительные культуры клеток: первичные культуры - ПЭК, ПТ, ТБ, первичная и постоянная культура клеток КСТ и др. Характер ЦПД выражается в основном мелкозернистой дегенерацией, округлением клеток, отделением их от стекла, истончением и дегенерацией монослоя. В перевиваемых линиях клеток ЭКЛ, КСТ активность, например, штамма ВК-IBI №28 достигала Ю7”1 ТЦД50/мл [35].
В процессе длительного пассирования вируса ВД-БС в культуре клеток КСТ наблюдали спонтанную контаминацию другими вирусными агентами. При электронном микрокопировании, чаще наблюдалось вирусные частицы морфологически сходные с герпес вирусом.
1.5.2. б. Вирус энцефаломиокардита мышей (ЕМС)
Вирусы ЕМС, относиться к пикорновирусам, составляют подгруппу близко родственных агентов Columbia-SK, ММ, EMC, Mengo, F, АК, Lj32, SVW и Otlieb [163, 164]. Пути их передачи не известны, хотя очень вероятно, что в переносе инфекции могут принимать участие членистоногие. Большинство штаммов высоко патогенно для грызунов (мышей, хлопковых крыс, хомяков, морских свинок). При заражении в мозг или