Биотехнологические экспресс-методы в микробиологии и вирусологии

• Автор: Макарян, Эдуард Артемович
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Тверь
• Количество страниц: 318 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОСК СОКРАЩЕНИЙ И СЛОВ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Инфекционные заболевания животных,

распространение и клинические признаки

1.2 Репликация, антигенные свойства и размножение микроорганизмов

1.3 Патогенность возбудителей инфекционных

заболеваний в эксперименте

1.4 Культуральные свойства микроорганизмов

1.5 Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний

1.6 Лечение инфекционных заболеваний
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы
2.2 Микроорганизмы
2.3 Культуры клеток, среды и растворы
2.4 Культивирование диплоидных культур клеток
2.5 Культивирование микробов
2.6 Культивирование вируса в культуре клеток—;
2.7 Приготовление препаратов для изучения цитоморфологии
2.8 Титрование вируса методом бляшек
2.9 Титрование вируса по бляшкообразующим единицам в модификации—
2.10 Реакция агглютинации
2.11 Качественная реакция агглютинации целлюлозы
2.12 Способ приготовления латексного диагностикума
2.13 Бумажная хромотография
2.14 Реакция нейтрализации вируса
2.15 Экспериментальные животные
2.16 Сыворотки
2.17 Способ максимального выделения вирусных антигенов
2.18 Электорофез вирусных антигенов
2.19 Иммунизирующий препарат
2.20 Состав для получения перитонеальных макрофагов А-2ПТК
2.21 «Повин-ВМ»- препарат для лечения и профилактики респираторных желудочно-кишечных инфекций вирусной и бактериальной этиологии и
средство для инактивации микроорганизмов in vitro
2.22 Разработка схемы лечения трансмиссивного
гастроэнтерита кроликов
2.23 Реакция торможения миграции лейкоцитов
2.24 Реакция Ерне-Каненгема
2.25 Разработка схемы лечения «Повином-ВМ» пневмоэнтерита
у морских свинок
2.26 Разработка схемы лечения «Повином-ВМ» инфекционного мастита крыс
2.27 Разработка профилактического применения «Повина-ВМ»
в свиноводстве
2.28 Иммунизирующий препарат PC-вируса
2.29 Статистическия обработка данных
З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Изучение спектра чувствительности, культур клеток к штаммам «РС-Б»
и «Long»
3.1.1 Подбор тканей для культивирования респиратоно-синцитиалыюго вируса штамма «Long»
3.1.2 Изучение чувствительности первичных культур клеток к респираторносинцитиальному вирусу штамма «РС-Б»
3.1.3 Чувствительность диплоидных культур клеток к штамму «РС-Б»
3.1.4 Чувствительность перевиваемых клеточных линей к штамму «РС-Б»—
3.2 Оптимизация условий культивирования штаммов «РС-Б» и «Long» в чувствительных культурах клеток
3.2.1 Влияние концентрации респиратоно-синцитиального вируса штамма «Long» на урожайность----------------------------------------------87'
3.2.2 Определение максимального урожая респираторно-синцитиального вируса штамма «Long» в динамике
3.2.3 Адаптация штамма «РС-Б» к культуре клеток
3.2.4 Стимуляция инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса для получения высоких урожаев
3.3 Увеличение выхода бакмассы при культивировании микроорганизмов—
3.4 Методы контроля размножения и определения инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота и человека в культурах клеток
3.4.1 Определение инфекционной активности вируса по бляшкообразующим единицам——---------------------------------------------------------110 ■
3.5 Разработка экспресс-методов определения респираторно-синцитиального вируса и гриппа
3.5.1 Активность антигенов респираторно-синцитиального вируса, накопленных в разных культурах клеток для приготовления целлюлозных диагностику-мов :
3.5.2 Титры респираторно-синцитиального вируса в реакции коагглютинации-стафилококка в модификации
3.5.3 Разработка экспресс-метода в диагностике респираторно-синцитиального вируса в реакции агглютинации целлюлозы
3.5.4 Способ определения иммуноглобулинов в биологических жидкостях в реакции агглютинации целлюлозы
3.6 Способ экспресс-диагностики PC- вируса в реакции
агглютинации латекса
В отлнчие от PC-вируса человека, PC-вирус крупного рогатого скота хуже размножается в культуре клеток. Во многих литературных источниках подчеркивается трудность выделения и культивирования PC-вируса крупного рогатого с кота в клеточных культурах, что усложняет изучение этого заболевания и его этиологию (,11).
Имеется- ряд сообщений о выделении PC-вируса крупного рогатого скота в клеточных культурах, чаще в первичных, и, как правило, не в первом пассаже исходного материала. Но исследователям редко удается закрепить и пассировать выделенный штамм в дальнейшем. По сообщению Odigaard О A., Krossrud Y. (171), им удалось выделить PC-вирус от телят с признаками респираторного заболевания в линии клеток слизистой носовых раковин крупного рогатого скота.
В Чехословакии во время вспышки ОРЗ на откормочной ферме от телят был выделен PC-вирус в первичной культуре почки эмбриона коровы лишь к 5-7 пассажу исходного материала (181).
При эпизоотии телят в США (149), удалось выделить в первичной культуре легкого эмбриона коровы респираторно-синцитиальный вирус на втором пассаже.
Позднее ряд исследователей в первичной или субкультуре легкого эмбриона коровы успешно изолировали вирус (159, 190). Так, по данным Gillete К. (123) в 5 из 225 ив 13 из 32 носовых секретов бычков на, откорме, был выделен РСВ в первичной культуре легкого на1-ом, 2-ом пассажах. Есть одно сообщение о выделении PC-вируса крупного рогатого скота в субкультуре кожи эмбриона коровы (163).
Хараламбиев Е. и др. (22) сообщили о выделении и дальнейшем культивировании в диплоидной культуре клеток щитовидной железы ягненка двух цито-патогенных штаммов «Антоново» 148/32 и Антоново 456/32 бычьего респираторно-синцитиального вируса.