Биологическая характеристика штамма ВН-96 вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней и разработка биотехнологических параметров его культивирования

• Автор: Симоненко, Наталья Валерьевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 158 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Трансмиссивный (вирусный) гастроэнтерит свиней (историческая справка)

1.2. Физико-химические и биологические свойства вируса ТГЭС..

1.3. Культуральные свойства вируса ТГЭС

1. 4. Влияние различных факторов на уровень накопления вирусов

в монослойных культурах клеток

1.5. Некоторые аспекты стандартизации перевиваемых линий клеток

1. 6. Стабилизация вируса методом лиофильного высушивания

1. 7, Средства и методы специфической профилактики ТГЭС
ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. 1. Материалы и методы
2. 1. 1. Объекты исследования
2. 1.2. Подготовка перевиваемой линии клеток
2. 1. 3. Методы индикации микоплазм в клеточных культурах
2. 1.4. Цитометрические исследования линий клеток
2. 1.5. Условия культивирования вируса
2. 1. 6. Цитоморфологические методы изучения инфицированных и
контрольных культур клеток
2. 1. 7. Изучение бляшкообразующей способности штамма ВН-96.
2. 1. 8. Физико-химические методы исследования культурального
вируса ТГЭ свиней
2. 1.9. Лиофилизация вируса
2.1.10. Проверка антигенной и биологической активности штамма ВН-96 вируса ТГЭС
2.1.11. Статистическая обработка результатов исследований

2. 2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Выделение и биологическая характеристика штамма ВН-96 вируса ТГЭС
2.2.2. Сравнительная характеристика и оценка чувствительности сублиний клеток почки эмбриона свиньи к штамму ВН-96 вируса ТГЭС..
2.2.3. Стандартизация перевиваемых сублиний клеток СПЭВ - субстратов для производства штамма ВН-96 вируса ТГЭС
2.2.4. Оптимизация условий культивирования вируса ТГЭС в сублинии клеток СПЭВ-б
2.2.5. Серийное пассирование штама ВН-96 вируса ТГЭС в сублинии клеток СПЭВ-б
2.2.6. Опытно-промышленное производство вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней
2.2.7. Лиофильное высушивание культурального вируса ТГЭС
2.2.8. Изучение антигенных свойств и биологической активности штамма ВН-96 вируса ТГЭС
2.2.9. Сравнительная оценка иммунобиологических свойств штамма «ВН-96» вируса ТГЭС в условиях свиноводческого комплекса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
Список сокращений
ДСН ПААГ - додецилсульфат натрия полиакриламидный гель ВИГС - вирус инфекционного гастроэнтерита свиней ВТГС - вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней В Н А - вируснейтравизующие антитела
ВНИИВнМ - Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии
ВШШЗЖ - Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных МСХ РФ
ГАЕ - гемагглготиниругощая единица ЗС - защитная среда
ИБП - иммунобиологические препараты ИФА - иммуноферментный анализ КЭ - куриный эмбрион
НТК' - программированная гибель клеток (апоптоз)
ШОК - перевиваемая линия клеток
ПНС - перевиваемая культура клеток почки поросенка
ПС - питательная среда
ПЦ - проточная цитометрия
IIЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭС - культура клеток почек эмбриона свиньи
РМН - реакция микронейтрализации
СПЭВ - перевиваемая культура клеток почки эмбриона свиньи
ТГЭС - трансмиссивный (вирусный) гастроэнтерит свиней
ТПД 50 - 50%-ная тканевая цитопатическая доза
ФБР - фосфатно-буферный раствор
ФАЛ - фторхинолоны
ЦОД - цитопатическое действие
Э - энрофлоксацин
Основным методом борьбы с ТГЭС является специфическая профилактика с использованием живых, инактивированных, ассоциированных и тканевых вакцин [3, 130]. Сложность специфической профилактики при трансмиссивном гастроэнтерите свиней заключается в том, что наиболее тяжело, со 100% летальным исходом, заболевают поросята, заражение которых происходит в первые часы после рождения, с последующими прогрессивно развивающимися необратимыми патологическими изменениями, приводящими к быстрой гибели поросят [95]. За этот незначительный отрезок времени иммунная система поросят не в состоянии обеспечить развитие специфического иммунного ответа. Следовательно, главную роль в развитии лактогенного иммунитета играют антитела, передающиеся в организм поросят через молозиво и молоко [97, 98]. Поэтому вакцинопрофилактика против ТГЭС чаще всего заключается в иммунизации супоросных свиноматок.
Инактивированные вакцины
Инактивированные теплом тканевые вакцины из вирулентных штаммов вируса ТГЭС впервые предложил C.J Welter [211], однако, эффект этих препаратов был незначительным. И.Л. Обухов [69] изучал эффективность инактивированной вакнины против ТГЭС из чешского штамма «V-91» на порося-' тах при однократном и двукратном введениях. Он отметил, что однократное введение вакцины 18-21 дневным поросятам на 13 день вызывает образование специфиеских антител в титре 16-20 ГАЕ. В крови иммунизированных животных антитела сохранялись в течение 5 месяцев.
В.Н. Ласкавый [44] доказывает, что однократное применение инактивированной вакцины из штамма «ВГНКИ-76 №8» в 23-27 дневном возрасте поросятам в дозе 2,5-3,0 мл в разведешш 1:100, при содержании в одной иммунизирующей дозе вируса 106’5-107,5 ТЦД50/мл, обеспечивало наибольшую сохранность животных. Данная схема позволила сократить надеж поросят-отъемышей на 26,5% и увеличить живую массу одной головы на 6 кг при передаче животных на откорм, по сравнению с контрольными группами.