Регуляция NMDA-рецепторами функций T-лимфоцитов у больных рассеянным склерозом

• Автор: Кузьмина, Ульяна Шафкатовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 204 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ГЛУТАМАТ И ЕГО РЕЦЕПТОРЫ В ПАТОГЕНЕЗЕ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Эпидемиология рассеянного склероза

1.2. Этиология рассеянного склероза

1.3. Иммунопатогенез рассеянного склероза

1.4. Роль глуматата в патогенезе рассеянного склероза

1.4.1. Глутамат как нейромедиатор центральной нервной системы

1.4.2. Глутаматная эксайготоксичность
1.4.3. Потенциальные источники и механизмы образования
избыточного глутамата при рассеянном склерозе
1.5. Рецепторы глутамата и их участие в патогенезе
рассеянного склероза
1.5.1. Метаботропные рецепторы глутамата
1.5.2. Ионотропные рецепторы глутамата
1.5.3. 14МГ)А-рецепторы глутамата
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования
2.1.1. Объект исследования
2.1.2. Клиническая характеристика доноров
2.1.3. Перечень использованных реактивов и материалов
2.2. Методы исследований
2.2.1. Забор крови/биоматериала
2.2.2. Выделение лимфоцитов периферической крови
2.2.3. Культивирование лимфоцитов периферической крови
2.2.4. Количественное определение цитокинов с помощью
иммуноферментного анализа
2.2.5. Иммунофенотипирование лимфоцитов
2.2.6. Внутриклеточное иммуиоцитохимическое окрашивание
цитокинов
2.2.7. Выделение суммарной РНК
2.2.8. Синтез комплиментарной ДНК (кДНК) с помощью
РНК-зависимой ДНК-полимеразы
2.2.9. Количественная полимеразная цепная реакция с обратной
транскрипцией (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени
2.2.10. Методы исследования дифференциальной экспрессии генов
2.2.11. Биоинформатические методы анализа
2.2.12. Статистическая обработка результатов исследований

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3 Л. Регуляция NMDA-рецепторами продукции цитокинов
Т-лимфоцитами
3 Л Л. Влияние блокады NMDA-рецепторов па продукцию цитокинов
Т-клетками здоровых доноров
3 Л .2. Эффекты блокады NMDA-рецепторов на продукцию цитокинов
Т-клетками доноров - больных рассеянным склерозом
3.2. Регуляция NMDA-рецепторами дифференцировки
Т-лимфоцитов
3.2.1. Эффект (+)-МК801 на экспрессию генов транскрипционных факторов, специфичных для Т-клеточных субпопуляций,
в лимфоцитах здоровых доноров и доноров - больных рассеянным склерозом
3.2.2. Влияние (+)-МК801 на соотношение CD4+ и CD8+ Т-клеточных субпопуляций у здоровых и доноров - больных рассеянным склерозом доноров
3.2.3. Эффект блокады NMDA-рецепторов на направление дифференцировки и баланс CD4+ Т-клеточных субпопуляций у здоровых допоров и доноров - больных рассеянным
склерозом
3.2.4. Эффект блокады NMDA-рецепторов на направление дифференцировки и баланс CD8+ Т-клеточных субпопуляций у здоровых доноров и доноров - больных рассеянным
склерозом
3.3. Гены, дифференциально экспрессирующиеся при блокаде
NMDA-рецепторов в Т-лимфоцитах
3.3.1. Экспрессионный профиль генов в Т-лимфоцитах здоровых доноров в условиях блокады NMDA-рецепторов
3.3.2. Экспрессионный профиль генов в Т-лимфоцитах доноров -больных рассеянным склерозом в условиях блокады NMDA-рецепторов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
БСА - бычий сывороточный альбумин Глу - глутамат
ГЭБ - гемато-энцефалический барьер
ДЭГ - дифференциально экспрессирующие гены
МКА - моноклональные антитела
ПЦР - полимеразная цепная реакция
PC - рассеянный склероз
СМЖ - спинномозговая жидкость
ФМА - форбол-меристат-ацетат
ЦНС - центральная нервная система
ЭАЭ - экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит FBS - эмбриональная бычья сыворотка
GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
iGluR — ионотропные рецепторы глутамата
IL-10 - интерлейкин-
IL-17 - интерлейкин-
IL-4 - интерлейкин
IL-6 - интерлейкин-
INFy - интерферон гамма
mGluR - метаботропные рецепторы глутамата
NMDA - А-метил-ТЗ-аспартат
PBS - натрий-фосфатный буфер
Тс - цитотоксические Т-клетки
TCR - Т-клеточный комплекс
TGF(3 - трансформирующий фактор роста (
Th - Т-хелперы
TNFa - фактор некроза опухоли альфа Treg - Т-регуляторные клетки

энцефаломиелита (Pitt et al., 2000). С помощью магнитно-резонансной спектроскопии было показано, что при рассеянном склерозе уровень медиатора возрастает не только в острых очагах демиелинизации, но и в «кажущемся нормальным» веществе мозга (Srinivasan et al., 2005). Предполагается, что именно эксайтотоксическая функция глутамата становится доминантной в хронической фазе PC, когда преобладают нейродегенеративные процессы, что вызывает дальнейшее прогрессирование заболевания и усиление клинических симптомов болезни (Завалишин и др., 2003).
1.4.3. Потенциальные источники и механизмы образования избыточного глутамата при рассеянном склерозе
В литературе имеется большое количество данных, свидетельствующих о том, что повышение экстраклеточиого уровня глутамата может являться результатом изменений гомеостаза нейромедиатора. Действительно, нарушения как продукции глутамата, так и его высвобождения, а также удаления из синаптической щели способны приводит к нейротрансмиттерной диерегуляции и повышению концентрации Глу до эксайтотоксического уровня. В связи с этим внимание исследователей обращено к изучению активности ферментов метаболизма и белкам-перепосчикам Глу (Vercellino et al., 2007), а также другим факторам, влияющим на гомеостаз медиатора при PC и ЭАЭ. Как уже упоминалось ранее, в нейротрансмиттерной регуляции участвует большинство типов клеток ЦНС, таким образом, каждый их них может стать источником избыточного Глу (Kostic et al., 2013).
Повышение концентрации медиатора, как отмечают некоторые авторы, может быть результатом дисфункции активированных астроцитов. Известно, что астроциты выполняют множество функций, необходимых для поддержания нормальной работы мозга (Blackburn et al., 2009). В