Экспрессия генов-мишеней гормонального канцерогенеза под воздействием ДДТ, бензо[a]пирена и 3-метилхолантрена

• Автор: Чанышев, Михаил Дамирович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 106 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эстрогены и канцерогенез

1.2 Промоторный тип канцерогенеза

1.2.1 Механизм действия эстрогенов

1.2.2 Гены-мишени гормонального канцерогенеза

1.3. Генотоксический тип канцерогенеза

1.4. МикроРНК и канцерогенез

1.5. Токсичность ПХБ (ПолиХлорированныхБензолов)
1.6. Токсичность бензо[а]пирена и 3-метилхолантрена
1.7. Заключение к литературному обзору
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Животные
2.2 Выделение микросом животных
2.3 Определение концентрации белка в микросомах
2.4. Определение общего содержания цитохрома Р450 в микросомах 42 печени
2.5. Определение ферментативной активности цитохромов Р450
2.6. Вертикальный электрофорез белков в полиакриламидном геле в 43 денатурирующих условиях
2.7. Полусухой электроперенос белков на нитроцеллюлозную 43 мембрану
2.8. Иммунохимический анализ белков микросом
2.9. Выделение РНК
2.10. Электрофорез РНК
2.11. Определение концентрации РНК
2.12. Реакция обратной транскрипции
2.13. Проведение ЫТ-РС11
2.14. Выделение микроРНК
2.15. Реакция обратной транскрипции для микроРНК
2.16. Проведение КТ-РСЯ для определения экспрессии микроРНК
2.17. Статистическая обработка данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
З Л. Влияние ДДТ, БП, МХ на экспрессию микроРНК
3.2. Влияние ксенобиотиков на микросомную монооксигеназную 59 систему печени, матки, яичников самок крыс
3.2.1. Общее содержание цитохрома Р450 в микросомах печени
3.2.2. Ферментативная активность изоформ цитохрома Р450
3.2.3. Содержание изоформ цитохрома в микросомах печени
3.2.4. Уровень экспрессии генов цитохромов Р450
3.1.5. Уровень экспрессии генов рецепторов АкЯ, РХЯ, САЯ
3.3. Влияние ксенобиотиков на экспрессию генов-мишеней 74 гормонального канцерогенеза
3.3.1. Уровень экспресии ЕЯа, Сусііп О;
3.3.2. Уровень экспрессии СУР 19
3.3.3. Уровень экспрессии ЯиЬТІЕІ
3.4. Исследование эффектов ксенобиотиков для половозрелых и 82 неполовозрелых самок крыс
3.5. Роль ДДТ, БП и МХ в гормональном канцерогенезе
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
CYP - цитохром Р
CYP19 - цитохром Р450 19-го семейства, ароматаза ERa, ER(3 - эстрогеновые рецепторы аир
ERE - Estrogen Responsive Element, эстроген-чувствительный элемент AF-l/AF-2 - Activation function 1/2, трансфакторы рЗ 00/СВР - комплекс из двух трансфакторов, рЗОО и СВР NR - ядерный рецептор
CAR - конститутивный андростановый рецептор
сАМР - циклоАМФ, циклоаденозинмонофосфат
PXR - прегнановый X рецептор
AhR - арилгидрокарбоновый рецептор
PAPS - 3’-фосфоаденозин-5’-фосфосульфат
Ei - эстрон
Е2 - эстрадиол
ДТ(ДДТ) - (1,1,1-Трихлор-2,2-ди(п-хлорфенил)этан, инсектицид БП - бензо[а]пирен MX - 3-метилхолантрен ФБ - фенобарбитал
ПАУ - полициклические ароматические углеводороды ПХБ - полихлорированные хлорбензолы ПЦР - полимеразная цепная реакция ОТ - обратная транскрипция

смерти насекомого [166]. ДДТ не обладает острой токсичностью для человека, по данным ВОЗ ЬБ5о составляет -120 мг/кг.
Технический ДДТ является смесью изомеров, наибольшая доля (70-75%) приходится на п,п’-изомер, также в нем представлены о,п’- и о,о’- изомеры (рис. 16). В начале 60х годов ежегодное мировое потребление ДДТ составляло 400 ООО тонн (70-80% использовалось в сельскохозяйственных целях) [151]. Применение ДДТ позволило добиться значительных успехов в борьбе с малярией. Так, в Греции в 1938 году был миллион больных малярией, а в 1959 году всего лишь 1200 человек.
п,п’-ДДТ (70-75%) п,о’-ДДТ о,о’-ДДТ
Рис. 16. Изомеры ДДТ, составляющие основную долю технического
продукта.
В 1962 году в свет вышла книга Рэйчал Карсон «Silent Spring», привлекшая внимание к загрязнению окружающей среды ДДТ и вызвавшая широкий общественный резонанс в мире. После 1962 года объёмы производства и применения ДДТ начали падать. Также в 1970 г. ДДТ был исключен из официального списка пестицидов, используемых в СССР, в 1973 его использование как инсектицида было запрещено в США [164]. В настоящее время ДДТ применяется очень ограниченно в эндемичных по малярии странах.
Как типичный хлорорганический инсектицид, ДДТ не обладает острой токсичностью. Это соединение обладает высокой устойчивостью к разложению: ни критичные температуры, ни ферменты, катализирующие метаболизм чужеродных веществ, ни свет не способны оказать на процесс разложения ДДТ сколько-нибудь заметного эффекта, период полураспада