Регуляция I и II типов программированной клеточной гибели T-лимфоцитов при атопической бронхиальной астме

• Автор: Скибо, Юлия Валерьевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 176 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕЕШЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Программированная клеточная смерть и иммунная система

1.1.1. Биохимические проявления апоптоза

1.1.2. Морфологические проявления апоптоза

1.1.3. Механизм апоптотической клеточной гибели

1.2. Физиологическая роль аутофагии

1.2.1. Классификация аутофагии

1.2.2. Молекулярные механизмы аутофагии
1.2.3. Аутофагия как механизм клеточной смерти
1.3. Белки теплового шока: разнообразие, структура и функции
1.3.1. Физиологическая роль белка теплового шока НБР70
1.3.2. Физиологическая роль белка теплового шока НБР90
1.4. Функциональное взаимодействие между программированной клеточной гибелью и белками теплового шока
1.4.1. Анти-апоптотическая роль белков теплового шока
1.4.2. Влияние апоптоза на индукцию белков теплового шока
1.4.3.Взаимодействие между аутофагией и белками теплового шока
1.5. Основные клеточные популяции иммунного ответа
1.5.1. Иммунорегуляторные субпопуляции Т-лимфоцитов
1.6. Механизмы развития атопической бронхиальной астмы
1.6.1. Роль программированной клеточной гибели в развитии воспаления при бронхиальной астме
Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Оборудование и реактивы
2.2. Объект исследования

2.3. Выделение субпопуляции Т-лимфоцитов методом
иммуномагнитной сепарации
2.4. Ультраструктурная характеристика Т-лимфоцитов методом ТЭМ
2.5. Исследование морфологии и топографии Т-лимфоцитов методом атомно-силовой микроскопии
2.6. Культивирование Т-лимфоцитов
2.7. Оценка апоптоза Т-лимфоцитов методом проточной цитометрии
2.8. Оценка аутофагии в Т-лимфоцитах
2.8.1. Определение экспрессии ЬСЗВ белка методом флуоресцентной микроскопии
2.8.2. Определение экспрессии ЬСЗВ белка методом
проточной цитометрии
2.8.3 .Визуализация лизосом методом флуоресцентной микроскопии
2.9. Электрофоретическое разделение клеточных белков и
вестерн-блотт анализ
2.10. Фенотипирование лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии
2.11. Определение содержания иммуноглобулинов в сыворотке
2.12. Выделение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)
2.13. Освобождение ЦИК от иммуноглобулинов
2.14. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Определение морфологии Т-лимфоцитов здоровых доноров
и больных АБА
3.1.1. Морфология Т-лимфоцитов здоровых доноров
3.1.2. Морфология Т-лимфоцитов больных легкой формой АБА
3.1.3. Морфология Т-лимфоцитов больных тяжелой формой АБА
3.2. Определение силы адгезии на поверхности Т-лимфоцитов
здоровых доноров и больных АБА
3.3. Оценка апоптоза Т-лимфоцитов больных АБА

3.4. Оценка аутофагии в Т-лимфоцитах больных АБА
3.4.1. Визуализация аутофагосом методом ТЭМ
3.4.2.Оценка аутофагии по уровню экспрессии маркерного БСЗ белка
3.5. Оценка содержания белков теплового шока в Т-лимфоцитах
больных АБА
3.6. Структура основных популяций лимфоцитов у больных АБА
3.7. Анализ показателей гуморального звена иммунитета у больных АБА
3.7.1. Содержание В-лимфоцитов и иммуноглобулинов различных
классов у больных АБА
3.7.2. Содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке
крови больных АБА
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

протеинов, их защита от денатурации или агрегации, сопровождение протеинов в ходе транслокации через мембранные каналы, блокирование активных центров до встречи с необходимым компонентом и т.д. (Бобкова, 2011). Хорошо известна роль белков теплового шока в поддержании структуры и функционирования белков в условиях стресса, определяемая их шаперонной активностью (Вееге,
2005). По своей сути шапероны - белки, облегчающие фолдинг, рефолдинг, сборку и разборку других белков и макромолекулярных комплексов (Мюльберг, 2004). Шапероны, синтез которых активируется стрессорными факторами, обозначают как стресс-белки. Если стрессорным фактором является тепловой шок, такие белки называют белками теплового шока. Исторически термин “белок теплового шока” используется и в случаях, когда экспрессия родительского гена индуцируется не только собственно тепловым шоком, но и иными факторами (Ивашкин, 2011).
Конституциональные БТШ синтезируются в клетке постоянно (под действием факторов роста, гормонов), для их активации не требуется воздействия на клетку повреждающего фактора, т. е. синтез их при стрессе не увеличивается. Они составляют 5-10 % всех белков клетки.
Синтез индуцибельных БТШ, составляющих до 15 % всех клеточных белков, начинается вскоре после воздействия на клетку повреждающего агента (температурный, оксидантный, токсический, осмотический, а также воспалительный стрессы) (Lindquist, 1998). Данные, полученные in vivo, свидетельствуют о том, что разделение БТШ на конституциональные и индуцибельные в человеческом организме достаточно условно, т. к. их синтез зависит от специализации и функциональной активности клеток.
К настоящему времени выделено и охарактеризовано несколько семейств БТШ, различающихся по молекулярному весу и структурно-функциональным особенностям (Burel, 1992):
• высокомолекулярные БТШ - включают протеины с молекулярной массой более 100 кДа (БТШ-100, БТШ-110);
• БТШ-90 - включают протеины с молекулярной массой от 81 до 99 кДа;