Физиолого-биохимические особенности адаптации крыс при аллоксановом диабете

• Автор: Гати Моханнад Абдулраззак Гати
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 144 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ТЕРМИНОВ

АДФ - аденозиндифосфат;

АТФ - аденозинтрифосфат;

НАДН (ХАПН) - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный; НАД' (ХАИ^) - никотинамиддинуклеотид окисленный;

сдг - сукцинатдегидрогеназа;

ФАД - флавинадениндинуклеотид;

Е - ферментативная единица;

цтк - цикл трикарбоновых кислот;

гц - глиоксилатный цикл;

этц - электронтранспортная цепь;

ПНР - полимеразная цепная реакция;
РНК - рибонуклеиновая кислота;
ицл - изоцитратлиаза;
мс - малатсинтаза;
кДНК - комплиментарная дезоксирибонуклеиновая кислота;
мдг - малатдегидрогеназа;
АГ - аконитатгидратаза;
СД - сахарный диабет;
вмя - вентромедиальное ядро;
БН - электрофоретическая подвижность.
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1 . ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Физиолого-биохимические аспекты адаптации метаболизма животных к сахарному диабету
1.1.1. Биохимия сахарного диабета
1.1.2. Аллоксановый диабет
1.2. Роль ферментов цикла Кребса и глиоксилатного пути
в трансформации основных метаболических потоков
1.2.1. Метаболизм углеводов
1.2.2. Метаболизм липидов
1.2.3. Механизмы адаптации при аллоксановом диабете
1.2.4. Глюконеогенез в тканях животных
1.2.4.1. Глиоксилатный цикл в тканях животных
1.3. Функционирование ключевых ферментных систем
в животной клетке
1.3.1. Аконитатгидратаза
1.3.2. Малатдегидрогеназа
1.3.3. Сукцинатдегидрогеназа
1 АМолекулярно-биологические особенности регуляции
функционирования ферментов при адаптивной реакции клеточного
метаболизма при диабете
1.5. Морфологические исследования изменений тканей и органов
при сахарном диабете
Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Объекты и методы исследования
2.1.1. Объект исследования
2.1.2. Методы исследования
2.1.2.1. Получение материала для исследования

2.1.2.2. Определение содержания глюкозы в крови
2.1.2.3. Определение содержания гликогена
2.1.2.4. Определение активности ферментов
2.1.2.5. Определение количества белка
2.1.2.6. Выделение митохондрий из органов крыс
2.1.2.7. Определение перекрестного загрязнения фракций
2.1.2.8. Выделение суммарной клеточной популяции РНК
2.1.2.9. Аналитический электрофорез нуклеиновых кислот в геле агарозы
2.1.2.10. Обратная транскрипция
2.1.2.11. Подбор специфических праймеров
2.1.2.12. Проведение обратнотранскриптазной полимеразной реакции
2.1.2.13. Проведение полимеразной цепной реакции в реальном времени
2.1.2.14. Выделение геномной ДНК из печени крыс
2.1.2.15. Метилчувствительная рестрикция
2.1.2.16. Определение качественных и количественных показателей нуклеиновых кислот
2.1.2.17. Методика гистологических исследований
2.1.2.18. Статистическая обработка данных
2.3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
2.3.1. Физиолого-биохимические критерии, свидетельствующие
об индукции экспериментального диабета
2.3.1.1. Динамика изменения содержания глюкозы и гликогена
в крови крыс в норме и при диабете
2.3.1.2. Изменение массы животных и их внутренних органов
в норме и при диабете
2.3.1.3. Индукция маркерных ферментов глиоксилатного цикла
2.3.2. Результаты гистологических исследований печени и
поджелудочной железы у крыс при аллоксановом диабете

неодинаковы в различных органах. Оптимум pH фермента находится при

Специфическая аминокислотная последовательность белков определяет самоорганизацию линейной полипептидной цепи с образованием уникальной трёхмерной структуры, а также специфические функции и их регуляцшо [170].
Главные отличия в аминокислотном составе малатдегидрогеназы из разных объектов заключаются в количественном содержании и в процентной доле отдельных аминокислот. Так, фермент из термофильных зелёных несерных бактерий Chloroflexus aurantiacus характеризуется достаточно высоким содержанием аланина, глутамата, глицина, лейцина, аспартата, валина [39]. Цистеин обнаруживается в следовых количествах, триптофан - вблизи N-концевой последовательности. Содержание этих аминокислотных остатков в МДГ из других источников также невелико.
В целом множественные аминокислотные последовательности показывают достаточно низкую степень сходства первичной структуры малатдегидрогеназы из разных объектов, за исключением некоторых участков, важных для проявления каталитической активности, связывания коферментов и формирования поверхности субъединиц. Выявлено сравнительно небольшое количество консервативных остатков, участвующих в катализе [40]. Существует три остатка аргинина (Arg-102, Arg-109 и Arg-171), которые высоко консервативны во всех МДГ и имеют большое значение для связывания субстрата и катализа. Экспериментальный мутагенез показал, что отдельная замена аминокислот с глутамина на аргинин в позиции 102 может изменить ЛДГ на МДГ. Однако, несмотря на низкую степень сходства первичной структуры МДГ, трёхмерная структура молекул фермента из разных источников очень похожа. Малатдегидрогеназа включает два домена: структурно
консервативный N-концевой домен связывания динуклеотидов и С-концевой каталитический домен [42].