Экспрессия гена CD38 при раке толстой кишки

• Автор: Перенков, Алексей Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 143 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Молекула СИЗ
1.2 Энзиматическая функция молекулы СЭ
1.3 Рецепторная и сигнальная функции молекулы 0
1.4 Ген 0
1.5 мРНК гена СБ
1.6 Молекула 0038 при опухолях
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы
2.2 Выделение суммарной фракции нуклеиновых кислот
2.3 Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
2.4 Реакция обратной транскрипции
2.5 Полимеразная цепная реакция в реальном времени
2.6 Полимеразная цепная реакция
2.6.1 Детекция мРНК полноразмерной и альтернативной форм
2.6.2 Обнаружеие метилирования Срв динуклеотидов
2.6.3 Аллель-специфическая ПЦР
2.7 Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.8 Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.9 Иммуноферментный метод определения растворимых дифферецировочных молекул в сыворотке крови
2.10 Реакция непрямой иммунофлуоресценции
2.11 Статистический анализ результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Определение частоты обнаружения мРНК СЮ38 у больных раком толстой кишки
3.1.1 Разработка метода детекции полноразмерной и альтернативной форм мРНК СБ
3.1.2 Частота выявления полноразмерной и альтернативной форм мРНК СБ38 в опухолевых очагах больных раком толстой кишки
3.2 Разработка метода оценки уровня мРНК С 1)38 с использованием ПЦР в реальном времени
3.3 Экспрессия гена СОЭ8 у здоровых лиц и больных раком толстой кишки
3.4 Экспрессия гена СБ38 в клетках периферической крови и опухолевых очагах в зависимости от клинико-морфологических показателей больных раком толстой кишки
3.5 Исследование метилирования промоторного региона гена С 1)38 у больных раком толстой кишки
3.6 Разработка метода детекции однонуклеотидной замены 1470С/Т в гене СЭ38 с использованием аллель-специфической ПЦР
3.7 Исследование частоты встречаемости полиморфных вариантов гена С038 (1470С/Т) у здоровых доноров и больных раком толстой кишки..
3.8 Экспрессия гена С038 у здоровых доноров и больных раком толстой
кишки с разными генотипами ОНП 1470С/Т
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
U/ml — количество условных единиц в мл
дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты
е.а. — единицы активности
кДНК— комплементарная ДНК
мРНК- матричная РНК
н.о. - нуклеотидные основания
ОТ-ПЦР- обратная транскрипция-полимеразная цепная реакция
sCD38 - растворима форма молекулы CD
XJIJI - хронический лимфолейкоз
CD - claster of differentiation
ОНП — однонуклеотидный полиморфизм
full CD38 — полноразмерная форма мРНК
alt CD38 — альтернативная форма мРНК

маркировать стволовые клетки данной опухоли [Karimi-Busheri F. et al., 2011].
Albeniz I. с соавторами исследовал уровень НАД и АДФР в эритроцитах здоровых доноров и онкологических больных. В работе были взяты больные раком прямой кишки, раком желудка и раком молочной железы. Установлено, что у больных раком толстого кишечника значительно повышена НАД гидролазная активность молекулы CD38 и уровень АДФР, которые были связаны с повышением эксперссией гена CD38 [Albeniz I. et al., 2004]. И действительно как уже упоминалось ранее молекула CD38 является основным регулятором уровня НАД в клетке [Barbosa М.Т. et al., 2007]. Дальнейшие исследование этой группы показали увеличение экспрессии гена CD38 у онкологических больных, которое, видимо, частично связано с факторами, выделяемыми опухолью. Общеизвестна возможность выделения цитокинов опухолевыми клетками различной этиологии, так же известно, что цитокины способны индуцировать экспрессию молекулы CD38 [Siegall С.В. et al., 1990; Watson J.M. et al., 1990; Bendre M.S. et al., 2005]. Это увеличение экспрессии индуцировано и цитокинами, выделяемыми иммунной системой, в ответ на появившуюся опухоль. Данное исследование показывает возможность использования молекулы CD38 в качестве маркера опухолевого процесса в организме человека [Albeniz I. et al., 2011].
Изучение экспрессии молекулы CD38 в микроглии и макрофагах головного мозга мышей показало, что недостаток белка ведет к более длительной репарации мозговой ткани и меньшему накоплению в очаге поражения активированных макрофагов и микроглиальных клеток. Наличие экспрессии CD38 в тех же клетках, инфильтрирующих глиому, является показателем прогрессии опухоли. Исследования показали, что подавление экспрессии молекулы CD38 в иммунных клетках, инфильтрируемых опухолью, ведет к уменьшению прогрессии глиомы, за счет увеличения апоптотических процессов, и увеличению жизни больных мышей. Данное