Латеральный проточный иммуноанализ кардиомаркёров для экспресс-диагностики острого инфаркта миокарда

• Автор: Яковлева, Елена Алексеевна
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ЛПИА - латеральный проточный иммуноанализ ИХА - иммунохроматографический анализ ОИМ - острый инфаркт миокарда
с-БСЖК - белок, связывающий жирные кислоты из сердца человека ИФА - иммуноферментный анализ ПАВ - поверхностно-активные вещества Ат - антитело Аг - антиген

НЧЗ - наночастицы золота

ЗХВК - золотохлористоводородная кислота

КТ - квантовые точки

ТЭОС - тетраэтилортосиликат

АПТЭС - 3-аминопропилтриэтоксисилак

КФК - креатин фосфокиназа

Тн1- тропонин I

ТнТ- тропонин Т

ТнС - тропонин С

ТГФХ - тетракис(гидроксиметил) фосфоний хлорид
БСА - бычий сывороточный альбумин
ПАт - поликлональные антитела
МАт - моноклональные антитела
СЭМ - сканирующий электронный микроскоп

СОДЕРЖАНИЕ
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. ЛАТЕРАЛЬНЫЙ ПРОТОЧНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ
1.1. Строение иммунохроматографической тест-полоски
1.2. Теоретические основы латерального проточного иммуноанализа
1.3. Основные компоненты иммунохроматографических тест-систем
1.3.1. Аналитическая мембрана
1.3.1.1. Полимерный состав и свойства мембран
1.3.1.2. Факторы, влияющие на сорбцию белков на мембране
1.3.2. Мембрана для нанесения образца
1.3.3.Мембрана для нанесения конъюгата
1.3.4.Абсорбирующая (впитывающая) мембрана
1.3.5.Антитела в иммунохроматографическом анализе
1.3.6. Метки, используемые в иммунохроматографическом анализе
1.3.6.1. Латексные частицы
1.3.6.2. Флуоресцентные метки
1.3.6.3. Квантовые точки
1.3.6.4. Парамагнитные частицы
1.3.6.5. Коллоидное золото
1.3.6.6. Нанооболочки
Глава 2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОГО ИНФАРКТА
МИОКАРДА
2.1. Белок, связывающий жирные кислоты (с-БСЖК)
2.1.1. Структура и функции с-БСЖК
2.1.2. Методы определения с-БСЖК
2.2. Тропонин
2.2.1. Структура и функции тропонина
2.2. 2. Методы определения тропонинов
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Материалы и оборудование
3.2. Методы исследования
3.2.1. Получение наночастиц коллоидного золота по методу Френса
3.2.2. Получение золотых нанооболочек на сферах из диоксида кремния
3.2.3. Определение оптимальных условий сорбции антител на наночастицах золота
3.2.4. Получение конъюгата частиц золота с антителами
3.2.5. Получение конъюгата наносфер с антителами
3.2.6. Составление иммунохроматографической тест-полоски
3.2.7. Проведение иммунохроматографического анализа
3.2.8. Определение чувствительности и специфичности тест-системы
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. ПОЛУЧЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ ЗОЛОТА И КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛ НА ИХ
ОСНОВЕ
4.1. Получение и характеристика наночастиц золота
4.2. Получение конъюгатов антител, специфичных к с-БСЖК, с наночастицами золота.60 Глава 5. РАЗРАБОТКА ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ С-БСЖК
5.1. Оптимизация условий проведения иммунохроматографического анализа с
использованием в качестве метки наночастиц золота для определения с-БСЖК
5.1.1. Выбор пары антител
5.1.2. Влияние размеров наночастиц золота на аналитические характеристики тест-системы
5.1.3. Выбор аналитической мембраны
5.1.4. Оптимизация концентраций специфических реагентов
5.1.5. Выбор мембран для нанесения образца
5.2. Иммунохроматографический анализ с-БСЖК с использованием золотых нанооболочек в качестве метки
5.2.1 .Получение и характеристика золотых нанооболочек
5.2.2. Использование нанооболочек в качестве метки в иммунохроматографическом анализе
5.3. Определение с-БСЖК в сыворотке и цельной крови человека
5.4. Стабильность тест-системы с-БСЖК
Глава 6. РАЗРАБОТКА ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОПОНИНА
6.1. Получение конъюгатов антител, специфичных к тропонину I, с наночастицами

Глава 2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОГО ИНФАРКТА
МИОКАРДА
Инфаркт миокарда остается главной причиной смерти и инвалидизации населения развитых стран. Распространенность инфаркта миокарда имеет тенденцию к росту и составляет ~ 750 тыс. случаев в год. Многочисленными исследованиями установлено, что раннее начало терапии при подтвержденном диагнозе ОИМ позволяет уменьшить летальность как в первые часы, так и в более поздние сроки пребывания больного в стационаре. Поэтому своевременная диагностика ОИМ является одной из актуальных проблем современной кардиологии [74].
Повышение сывороточной концентрации миокардиальных маркеров, согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения, является одним из трех диагностических критериев для постановки диагноза острого инфаркта миокарда [75].
Развитие ОИМ сопровождается обширным разрушением кардиомиоцитов и, следовательно, большим выбросом в кровь специфичных для миокарда белков. Важными характеристиками биохимических маркеров являются клеточная локализация, растворимость в воде, частота в циркуляции, специфичность для миокарда, и возможность количественного определения в плазме или сыворотке крови пациента.
На рисунке 8 представлена кинетика высвобождения наиболее известных миокардиальных
маркеров.
Рис. 8. Кинетика высвобождения кардиомаркеров
С 70-х годов в клинической практике используется определение уровня миоглобина в крови. Миоглобин относится к ранним маркерам ОИМ - нормализация показателя происходит,