Защитное действие карнозина, включенного в состав нанолипосом, в условиях окислительного стресса in vitro и in vivo

• Автор: Коновалова, Евгения Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 164 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Окислительный стресс и антиоксиданты
1.1.1. Роль активных форм кислорода в нормальных и патологических условиях
1.1.1.1. Кислородные радикалы и их повреждающее действие на клетку
1.1.1.2. Окисление и продукция свободных радикалов
1.1.2. Антиоксидантная система клеток
1.1.3. Карнозин и родственные ему соединения
1.1.4. Нанопрепараты и их применение
1.1.5. Окислительный стресс и мозг
1.1.6. Апоптоз и некроз как возможные пути гибели нервных клеток
1.1.7. Свободнорадикальное окисление липидов и антиоксидантная
терапия при заболеваниях ЦНС.
1.2. Возможности изучения механизмов развития окислительного стресса на разных биологических объектах, включая клеточные культуры.
1.2.1. Экспериментальные модели окислительного стресса.
1.2.2. Клеточные культуры для изучения ОС.
1.2.2.1. Гранулярные клетки мозжечка.
1.2.2.2. Клеточная культура РС-12
1.3.ЇчПУГОА рецепторы и клеточный сигналинг.
1.4.Индукторы окислительного стресса.

1.4.1. NMDA
1.4.2. Гомоцистеиновая кислота
1.4.3. Полиамины
1.4.4. Акролеин
1.4.5. Пероксид водорода
1.5.Проточная цитометрия
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Моделирование окислительного стресса на культуре клеток vitro. PC-12 in
2.1.1. Характеристика клеточной культуры.
2.1.1.1. Культивирование клеток.
2.1.1.2. Подготовка клеток для анализа.
2.1.1.3. Дифференцировка клеточной дексаметазона и ЫОР-р культуры с помощью
2.1.2. Определение уровня активных форм гибели методом проточной цитометрии кислорода и клеточной
2.1.2.1. Проточная цитометрия.
2.1.2.2. Определение уровня активных форм кислорода (АФК).
2.1.2.3. Определение доли мертвых клеток
2.1.3. Определение экспрессии ЫМОА-рецепторов методом непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания антителами.
2.2.Способы индукции окислительного стресса
2.2.1. Пероксид водорода
2.2.2. N-MeTHn-D-acnapTaT
2.2.3. Гомоцистеиновая кислота
2.2.4. Полиамины
2.2.5. Акролеин
2.3. Введение карнозина и наполипосомальных конструкций на его основе в клеточную культуру PC-12 при моделировании ОС.
2.3.1. Схема экспериментов.
2.3.2. Приготовление нанолипосом, содержащих карнозин
2.3.2.1. Измерение размеров
2.3.2.2. Выбор оптимальной липидной композиции
2.3.3. Карнозинсодержащие нанолипосомы
2.3.4. Определение содержания карнозина в составе нанолипосом по диазореакции
2.4. Приготовление растворов.
2.5. Экспериментальные исследования in vitro и in vivo на быстро стареющих мышах линии SAM
2.5.1. Окислительный стресс in vitro
2.5.2. Выделение гранулярных клеток мозжечка.
2.5.3. Окислительный стресс in vivo
2.5.4. Устойчивость мышей к гипоксии
2.5.5. Определение общей антиоксидантной активности
2.6. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате ПОЛ происходит уменьшение стабильности липидного слоя, следствием которого является электрический пробой мембраны собственным мембранным потенциалом, то есть под действием разности электрических потенциалов, существующих на мембранах функционирующей клетки. Описанные процессы ведут к полной утрате мембраной ее барьерных функций (Владимиров Ю.А., 2000).
Активация свободнорадикального окисления липидов отмечена при различных заболеваниях, вызванных как эндогенными, так и экзогенными причинами. Особое значение в настоящее время придается нарушению регуляции в системе ПОЛ при неврологических заболеваниях. Так, активация процесса ПОЛ отмечена у больных с черепно-мозговой травмой (Зацепина С.Н. и др., 1983), с инфекционно-токсическим поражением ЦНС, прогрессирующих мышечных дистрофий (Бадалян Л.О. и др., 1984), при боковом амиотрофическом склерозе (Захарова М.П., 2001). По данным некоторых исследователей, некомпенсированная активация свободнорадикальных реакций в нервной ткани является важным звеном эпилептогенеза. (Крыжановский Т.Н. и др., 1984; Никушкин Е.В., 1991). Выявлено участие свободнорадикальных реакций и аутоантител к фактору роста нервов в патогенезе рассеянного склероза (Переседова А.В.,1999). Интенсификация процесса ПОЛ и снижение активности антиоксидантных ферментов, была обнаружена при развитии болезни Паркинсона (Cadet J. and Brannock С., 1998; Савищева О.С. и др., 2000). Особую патогенетическую значимость эти процессы приобретают при острых (острые арушепия мозгового кровообращения, ОНМК) и хронических (дисциркуляторпая энцефалопатия, ДЭ) сосудистых заболеваниях головного мозга (Суслина
З.А., Максимова М.Ю., 1996, 2007; Федорова Т.Н., 2004). Несколько последних обзоров освещают роль АФК в патофизиологии таких нейродегенеративных заболеваний как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона. (Trompier D. et al., 2013; Rao V., Carlson E. and Yan S. 2013).