Роль биосинтеза стеролов в чувствительности опухолевых клеток к блокаторам рецептора эпидермального фактора роста

• Автор: Горин, Андрей Олегович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 96 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Злокачественные опухоли и механизм их образования

1.2 Рецептор эпидермального фактора роста и его роль в клетках опухолей

1.2.1 Строение рецептора эпидермального фактора роста

1.2.2 Сигнальный путь рецептора эпидермального фактора роста

1.2.3 Путь эндоцитоза и деградации рецептора эпидермального фактора роста

1.2.4 Блокаторы рецептора эпидермального фактора роста

1.3 Исследование взаимодействия сигнальных путей при помощи синтетической летальности
1.4 Биосинтез стеролов их роль и в клетках
1.4.1 Путь биосинтеза стеролов
1.4.2 С4-деметилирующий комплекс
1.5 Метаболизм стеролов и опухоли
1.6 Заключение
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Реактивы и оборудование
2.2 Объекты исследования
2.2.1 Объекты исследования in vitro
2.2.2 Объекты исследования in vivo
2.3 Трансфекция клеток с помощью малой интерферирующей РНК
2.4 Анализ экспрессии белков методом иммуноблоттинга
2.5 Анализ выживаемости клеток

2.6 Анализ апоптоза
2.7 Иммунопреципитация и анализ убиквитинилирования рецептора ЭФР
2.8 Иммунофлуоресценция и анализ колоколизации сигналов
2.9 Проточная цитометрия
2.10 Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Увеличение чувствительности опухолевых клеток к блокаторам рецептора эпидермального фактора роста
3.2 Изменение стерильного профиля клеток при блокаде биосинтеза стеролов на различных участках
3.3 Влияние добавления метаболитов на жизнеспособность клеток
3.4 Карта взаимодействий ортолога гена SC4MOL в дрожжах Saccharomyces cerevisiae
3.5 Влияние блокады биосинтеза стеролов на эндоцитоз и деградацию рецептора эпидермального фактора роста
3.6 Влияние блокады биосинтеза стеролов на сигнальную активность рецептора ЭФР
3.7 Влияние блокады биосинтеза стеролов на рост ксенографтных
опухолей у мышей
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
^ОНЬ - НАО(Р)-5Іегоісі-<іеЬус1го§епа8е-1іке - декарбоксилаза из С
деметилирующего комплекса
РАКР - поли(АДФ-рибоза)-полимераза
8С4МОЬ - згего1-С4-піеШу1-охуба8е-1іке - С4-метилоксидаза из С4-деметилирующего комплекса ГМГ - З-гидрокси-З-метилглутарил ЭФР - эпидермальный фактор роста

VWR Scientific (США) Mettler Toledo (США) Eppendorf (Германия) Fisher (США)
Fisher (США)
Fisher (США)
The Baker Company (США)
Вортекс Genie-2 Весы аналитические PL601-S Центрифуга 5
Центрифуга Sorval Legend Micro 21 Микроцентрифуга 110 VAC С02-инкубатор Forma Scientific Ламинарный шкаф SteriGuard Hood Установка для содержания лабораторных LABEX (США) животных Cage Mouse Vent Rack Спетрофотометр NanoDrop 2000 Планшетный спектрофотометр Envision Оптический микроскоп Флуоресцентный микроскоп Конфокальный микроскоп Nikon С-1 Проточный цитофлуориметр FACSCalibur
Сканер мембран Licor Odyssey Проточный цитометр FACS-VantageSE Термостат
Fisher (США)
Perkin Elmer (США) Fisher (США)
Fisher (США)
Nikon (США)
BD BD Biosciences (США)
Licor (США)
BD Biosciences (США) VWR Scientific (США)
2.2 Объекты исследования
2.2.1 Объекты исследования in vitro
В работе использовались следующие клеточные линии: А431 (эпидермоидная карцинома), SCC61 и SCC25 (сквамозная карцинома), РС9 (немелкоклеточный рак легкого), HeLa (карцинома эндометрия), MCF12F (нормальный эпителий молочной железы). Все клеточные линии были получены из American Tissue Culture Collection (ATCC, США). Клеточные линии культивировались в ростовой среде DMEM, содержащей 10%