Механизмы влияния Т-кадгерина на рост, метастазирование и васкуляризацию меланомы

• Автор: Юрлова, Екатерина Ивановна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура и функции кадгеринов

1.2. ГФИ-заякоренные белки

1.3. Т-кадгерин - атипичный представитель кадгеринов

1.3.1. Роль Т-кадгерина в нейрогенезе

1.3.2. Роль Т-кадгерина в ангиогенезе

1.3.3. Роль Т-кадгерина в онкогенезе

1.4. Рост и развитие сосудистой сети

1.5. Механизмы опухолевой прогрессии
1.6. Меланома
Заключение обзора литературы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культуры клеток
2.1.1. Получение суммарной популяции клеток мышиной
меланомы В16F10 с экспрессией Т-кадгерина
2.1.2. Получение клонов клеток мышиной меланомы B16F10
с разным уровнем экспрессии Т-кадгерина
2.2. Экспериментальные животные
2.3. Получение МСК-ЖТ из мышей
2.4. Приготовление клеточных лизатов
2.5. Концентрирование ростовой среды от клеток клонов B16F10
2.6. Иммуноблоттинг
2.7. Оценка пролиферации клеток клонов B16F10 in vitro
2.7.1. Метод подсчёта абсолютного числа клеток
2.7.2. Метод измерения клеточного индекса
2.8. Оценка распределения клеток клонов B16F10 по фазам клеточного цикла in vitro
2.9. Оценка количества клеток клонов В16F10 на разных
стадиях некроза и апоптоза in vitro
2.10. Анализ экспрессии генов в клетках клонов B16F10

2.10.1. Выделение РНК
2.10.2. Синтез кДНК и полимеразная цепная реакция с детекцией
в режиме реального времени
2.10.3. Синтез кДНК и анализ профиля экспрессии генов
с помощью наборов R.T2 Profiler PCR Array
2.11. Оценка инвазивного потенциала клеток клонов B16F10 in vitro
2.12. Влияние среды от клеток клонов B16F10 МСК-ЖТ in vitro
2.12.1. Влияние среды от клеток клонов B16F10
на пролиферацию МСК-ЖТ
2.12.2. Влияние среды от клеток клонов B16F10
на миграцию МСК-ЖТ
2.13. In vivo модель гематогенно метастазирующей в лёгкие меланомы у мышей
2.13.1. Анализ кинетики роста и метастазирования клеток
клонов B16F10
2.13.2. Иммунофлуоресцентное окрашивание срезов
первичных узлов меланомы
2.14. In vivo модель хориоаллантоисной мембраны
куриного эмбриона
2.15. Статистический анализ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Анализ экспрессии Т-кадгерина в клетках
мышиной меланомы В16F10
3.2. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на пролиферацию
клеток клонов мышиной меланомы in vitro
3. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на распределение клеток клонов B16F10 по фазам клеточного цикла in vitro
3.4. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на количество клеток клонов B16F10, находящихся на различных стадиях апоптозаи некроза, in vitro
3.5. Исследование влияния среды роста от клеток клонов B16F10
на пролиферацию и миграцию МСК-ЖТ in vitro
3.5,1. Исследование влияния среды роста от клеток клонов

B16F10 на миграцию МСК-ЖТ
3.5.2. Исследование влияния среды роста от клеток клонов В16F10 на пролиферацию МСК-ЖТ
3.6. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина
на инвазивный потенциал клеток клонов B16F10 in vitro
3.7. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на профиль экспрессии клеток клонов B16F10 in vitro
3.8. Исследованеи влияния экспрессии Т-кадгерина нарост, метастазирование и васкуляризацию первичного узла меланомы B16F10 на модели гематогенно метастазирующей
в лёгкие меланомы у мышей
3.8.1. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на рост первичного узла мышиной меланомы В16F10
3.8.2. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на частоту очагов некроза на срезах первичных узлов меланомы В16F10
3.8.3. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина
на васкуляризацию первичных узлов мышиной меланомы
3.8.4. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина на вклад стромального компонента в формирование первичных узлов мышиной меланомы В16F10
3.8.5. Исследование влияния экспрессии Т-кадгерина
на метастазирование клеток клонов мышиной меланомы
3.9. Влияние экспрессии Т-кадгерина на неоангиогенез в меланоме B16F10 на модели хориоаллантоисной мембраны
куриного эмбриона
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

последующей организацией их в примитивную сосудистую сеть [Kässmeyer S. et al., 2009; Carmeliet P., Jain R.K., 2011]. Эта примитивная сосудистая сеть за счёт процесса ангиогенеза впоследствии дифференцируется на вены, артерии и капилляры. Многие годы считалось, что васкулогенез происходит только во время эмбрионального развития. Однако результаты многих лабораторий показали, что васкулогенез может происходить и во взрослом организме, а также при многих патологиях, например, при канцерогенезе [Ribatti D. et al, 2001; Auguste P. et ab, 2005; Persson A.B., Buschmann I.R., 2011]. Так, было обнаружено, что 40% эндотелиальных клеток в опухолях возникают из эндотелиальных клеток-предшественников костно-мозгового происхождения [Rafii S. et al., 2002].
Артериогенез представляет собой процесс перестройки уже сформированного сосуда, направленный, в основном, на увеличение его толщины и просвета. Индукция артериогенеза происходит в ответ на растяжение стенки сосуда, вызываемое увеличением внутрисосудистого давления и скорости кровотока [Deindl E., Schaper W., 2005;ITeil M. et al., 2006; Persson A.B., Buschmann I.R., 2011].
Ангиогенез представляет собой процесс, при котором зрелые эндотелиальные клетки мигрируют из сосудистой стенки в подлежащие ткани с формированием разветвленной сети капилляров [Carmeliet P., Jain R.K., 2011]. Во взрослом организме ангиогенез происходит при заживлении ран и развитии патологических состояний.
Ангиогенез регулируется сбалансированным выделением эндотелиальными, стромальными клетками и перицитами про- и антиангиогенных факторов.
На различных экспериментальных моделях было показано, что сосудисто-эндотелиальный фактор роста (VEGF) [Connoly D.T. et al., 1989; Leung D.W. et al., 1989], факторы роста фибробластов (FGFs),