Матричная РНК белков системы "интерлейкин-2 - рецептор интерлейкина-2" в опухолевых очагах

• Автор: Шумилова, Светлана Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 138 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Система «интерлейкин-2 - рецептор интерлейкина-2»

1.2 Альфа-цепь рецептора интерлейкина

1.3 Роль альтернативного сплайсинга пре-мРНК

в развитии опухоли

1.4 Альтернативный сплайсинг пре-мРНК IL-2Ra

1.5 Роль системы «IL-2 - IL-2R» в канцерогенезе

1.6 Характеристика раково-тестикулярных генов

1.6.1 Суперсемейство генов MAGE

1.6.2 Семейство генов LAGE/NY-ESO
1.6.3 Суперсемейство генов GAGE/PAGE/XAGE
1.6.4 Семейство генов SSX
1.6.5 Семейство генов CSAGE
1.7 Характеристика дифференцировочных молекул
клеток иммунной системы
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы
2.2 Выделение суммарной РНК
2.3 Реакция обратной транскрипции
2.4 Полимеразная цепная реакция
2.5 Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.6 Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.7 Реакция непрямой иммунофлуоресценции
2.8 Иммуноферментный метод определения растворимых дифферецировочных молекул в сыворотке крови
2.9 Метод ОТ-ПЦР для детекции мРНК дифференцировочных и раковотестикулярных белков
2.10 Компьютерный анализ данных
2.11 Статистический анализ результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Разработка метода одновременной детекции трех альтернативных форм мРНК 1Ь-2Ка на основе ОТ-ПДР
3.2 Альтернативные формы мРНК альфа-цепи рецептора интерлейкина-2 человека в опухолевых очагах больных раком толстого кишечника
3.3 Альтернативные формы мРНК 1Ь-2Ка в опухолевых очагах больных
раком легкого
3.4 Матричная РНК компонентов системы «интерлейкин-2 - рецептор интерлейкина-2» в опухолевых очагах больных раком тела матки
3.4.1 Оптимизация метода ОТ-ПЦР для детекции
матричной РНК ІЬ-2, ІЕ-2ЩЗ, ІЬ-Лу
3.4.2 Экспрессия генов ІЬ-2,1Ь-2КА, ІЕ-2ЯВ, 1Е-21Ю
в опухолевых очагах больных РТМ
3.5 Экспрессия генов системы «интерлейкин-2 - рецептор интерлейкина-2»
в клеточных линиях
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
а.о. - аминокислотные остатки
дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты
е.а. - единицы активности
кДНК - комплементарная ДНК
мРНК - матричная РНК
н.о. - нуклеотидные основания
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция/полимеразная цепная реакция
п.н.о. - пары нуклеотидных оснований
пре-мРНК - предшественник матричной РНК
РЛ - рак легкого
РТ гены - раково-тестикулярные гены
РТК - рак толстого кишечника
РТМ - рак тела матки
ІЕ-2 - интерлейкин
1Ь-2Я - рецептор интерлейкина
ТЬ-2ЛА - ген альфа-субъединицы рецептора интерлейкина
1Ь-2Ка - альфа-субъединица рецептора интерлейкина
1Ь-2КВ - ген бета-субъединицы рецептора интерлейкина
1Ь-2ЯР - бета-субъединица рецептора интерлейкина
1Ь-21Ю - ген гамма-субъединицы рецептора интерлейкина
1Ь-2Яу - гамма-субъединица рецептора интерлейкина
8СБ25 - растворима форма СБ25 антигена
8ІЬ-2Ла - растворимая форма альфа-субъединицы рецептора
интерлейкина-2 ТІЬб - лимфоциты, инфильтрирующие опухоль
Тге§в - регуляторные Т-клетки
и/т1 - количество условных единиц в мл
Группа генов XAGE (от англ. X Antigen - X антиген) включает как минимум 19 раково-тестикулярных генов, расположенных на X хромосоме в виде трех кластеров. XAGE1 в норме экспрессируется только в зародышевых клетках, XAGE2 и XAGE3 - во многих соматических клетках [179].
Гены XAGE1-3 состоят из пяти экзонов и характеризуются наличием множества альтернативных вариантов мРНК, каждый из которых содержит альтернативный сайт инициации трансляции [114]. Так, для гена XAGE1 известно четыре изоформы, полученные в результате альтернативного сплайсинга пре-мРНК: XAGEla,b,c и d. Белок XAGElb обнаруживается в ядрах опухолевых клеток и рассматривается как один из наиболее иммуногенных антигенов [179].
Ген PAGE1 (от англ. Prostate-Associated Gene - ген, ассоциированный с простатой) - единственный представитель своего семейства - был идентифицирован при исследовании клеточных линий, полученных от больных раком простаты. В нормальной ткани простаты его экспрессия отсутствует. PAGE1 локализован на X хромосоме человека и структурно схож с генами семейства GAGE. Интересной особенностью гена PAGE1 является высокая степень гомологии нуклеотидной последовательности его последних двух экзонов с нуклеотидной последовательностью 4 и 5-го экзонов генов GAGE (80%) [24].
1.6.4 Семейство генов SSX
SSX представляет собой семейство высокогомологичных ядерных белков, первоначально выделенных из клеток синовиальной саркомы. Всего в этом семействе идентифицированно 9 генов и 10 псевдогенов. Продукты генов SSX1, SSX2 и SSX4 участвуют в транслокации, характерной для клеток всех синовиальных сарком. Экспрессия большинства генов SSX в норме обнаружена в клетках семенников, яичников и плаценты, а также на незначительном уровне в клетках щитовидной железы [40], В то же время активность генов SSX3, 6, 8 и 9 не была обнаружена ни в одной нормальной ткани человека, однако SSX3 и