Интегрины бета 2 и бета 6 - новые маркеры альвеолярных клеток типа II

• Автор: Мухаметшина, Регина Талгатовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 108 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Альвеолярные клетки легких взрослой мыши
1.1. Расположение Альвеолярных клеток типа II в структуре легких
1.2. Характеристика АТІІ клеток
1.3. Функции альвеолоцитов II типа
1.4. Изменения структуры альвеолоцитов Н-го типа при заболеваниях
1.5. Формирование группы клеток альвеолярного газообмена в процессе развития легких (Клетки АТІ и АТІІ)
1.6. Взаимосвязь альвеолярных клеток АТИ и АТІ
1.7. Сурфактантные протеины и интегрины эпителиальных (альвеолярных) клеток легких
2. Интегрины
2.1. Общая характеристика интегринов
2.1.1. Характеристика интегрина бета
2.1.2. Характеристика интегрина бета-
2.2. Интегрины и альвеолярные клетки типа II, их взаимосвязь.
3. Уій-сигнальньій путь
3.1. Влияние Угй-сигнализации на клеточный цикл и пролиферацию клеток
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Материалы и объекты исследований
1.2 Методы исследования
1.2.1. Выделение клеток АТІІ легких мыши
1.2.2. Культивирование клеточной культуры ATII
1.2.3. Иммунное окрашивание клеточной культуры АТИ
1.2.4. Получение суммарной РНК и RT-PCR (Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией)
1.2.5. Вестерн-блоттинг
1.2.6. Изоляция клеток легких для экспериментально проточной цитометрии
1.2.7. Метод проточной цитометрии
1.2.8. FASP метод (ФАСП -фильтр автоматизированная подготовка проб) - Изоляция мембранных белков
1.2.9. Масс-спектрометрия: методы и данные анализа
1.3. Трансфекция
1.4. Математическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Масс-спектрометрический анализ мембранных белков
ATII и MLE-12 клеток
4.2. Экспрессия генов, ответственных за синтез мембранных
белков клеток альвеолярного типа II
4.3 Выявление белков, способных выполнить роль маркеров
клеток ATII типа
4.4. Определение присутствия Itgb2 и Itgbô в различных
клеточных линиях мыши
4.5. Определение наличия двух различных субпопуляций клеток ATII во взрослых легких и доказательство
специфичности протеинов ITGB2 и ITGB6 для данных видов
4.6. Определение локализации Itgb2 и Itgbô в изолированных альвеолярных клеток типа II
4.7. Участие специфического белка ITGB2 Wnt сигнализации
клеток

4.8. Участие специфического белка ГГСВ2 в газообмене
легких
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2.2. Интегрины и альвеолярные клетки типа II, их взаимосвязь
В работе Гусмана с соавторами (Guzman et al., 1994) было проведено исследование экспрессии некоторых интегринов, изолированных из человеческих пневмоцитов альвеолярного типа II. Результаты исследований показали, что 60-90% альвеолярных клеток типа II давали положительную реакцию на молекулы межклеточной адгезии - 1 (ICAM-1) (CD54), которые являются лигандами интегрина бета-2.
Было установлено, что небольшая часть клеток типа II экспрессировала субъединицы интегрина альфа-4 (CD49d). Однако другие интергины, например, альфа- V (CD51) при иммуноокрашивании альвеолярных клеток типа II, выявлены не были. Кроме того, в работе Гусмана с соавторами также приведены данные о том, что ряд интегринов регулируют участие лейкоцитов в воспалительных процессах (Guzman et al., 1994).
В работах Кима с соавторами (Kim et al., 1996) было показано, что в альвеолярных клетках типа II экспрессируют также интегрин бета-3.
Таким образом, показано, что альвеолярные клетки типа II синтезируют различные интегрины, некоторые из них участвуют в местных иммунных и воспалительных реакциях.
Еще одной функцией интегринов является обеспечение связи альвеолярных клеток типа П с белками матрицы альвеол.
Используя методы адгезии, Ким с соавторами (Kim et al., 1996) исследовал способность альвеолярных клеток типа II взаимодействовать с белками матрикса, такими как фибронектин, фибриноген и фибрин, и являются ли интергины синтезируемые клетками посредниками данного процесса.