Особенности физико-химических, кинетических и регуляторных свойств изоформ малатдегидрогеназы из печени крыс при аллоксановом диабете

• Автор: Фарис Сатар Абуд
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ТЕРМИНОВ

ЦТК - цикл трикарбоновых кислот АсАТ - аспартатаминотрансфераза АлАТ - аланинаминотрансфераза ОАА - оксалоацетат

ФАД1 - флавинадениндинуклеотид окисленный

ФАДН2 - флавинадениндинуклеотид восстановленный

АТФ - аденазинтрифосфорная кислота

АМФ - аденазипмонофосфорная кислота

ФЕП - фосфоенолпируват

ГЦ - глиоксилатный цикл

ПФП - пентозофосфатный путь

ТХУ - трихлоруксусная кислота

АГ - аконитатгидратаза
СДГ - сукцинатдегидрогеназа
ДХФИФ - дихлорфенолиндофенол
ДТТ - 1,4-дитпо-ОЬ-трейтол
Г-6-ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
МДГ - малатдегидрогеназа
МС - малатсинтаза
ИЦЛ - изоцитратлиаза
ИДГ - изоцитратдегидрогеназа
ПК - пируваткиназа
ПВК - пировиноградная кислота
ФЕП-КК - фосфоенолпируваткарбоксикиназа
Км - константа Михаэлиса
НАД+ (NAD+) - никотинамиддинуклеотид окисленный НАДН (NADH) - никотинамиддинуклеотид восстановленный Е — ферментативная единица

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Особенности биохимических нарушений при аллоксановом
диабете
1Л Л. Понятие об аллоксановом диабете
1Л .2. Ультраструктурные изменения клеток животных при диабете
и голодании
1Л .2 Л. Гликоген как основной энергетический субстрат клеток при
стрессовых условиях
1Л.2.2. Функционирование глиоксилатного цикла в тканях
животных и человека
1Л .2.3. Процессы гликолиза и глюконеогенеза в тканях высших
животных
1.2. Роль малатдегидрогеназы в регуляции метаболических
процессов
1.2Л. Общая характеристика малатдегидрогеназной
активности
1.2.2. Участие малатдегидрогеназы в метаболических
процессах
1.2.3. Молекулярная масса и субъединичное строение
1.2.4. Каталитические свойства малатдегидрогеназы
1.2.4.1. Общая характеристика каталитического действия
1.2.4.2. Кинетические параметры
1.2.5. Влияние концентрации ионов водорода на активность
малатдегидрогеназы

1.2.6. Влияние температуры на активность малатдегидрогеназы
1.2.7. Влияние интермедиатов и ионов на активность
малатдегидрогеназы
1.2.8. Изоферментный состав малатдегидрогеназы
1.3. Механизмы адаптации животных к диабету
1.3.1. Ультраструктурные изменения клеток животных
при диабете и голодании
1.3.2. Гормональная регуляция энергетического метаболизма у высших животных при пищевой депривации
1.3.3. Биохимические сведения о конверсии жирных кислот
в углеводы в клетках высших животных
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Объект и методы исследования
2.1.1. Объект исследования
2.1.2. Методы исследования
2.1.2.1. Контроль за индукцией диабета
2.1.2.2. Получение материала для исследования
2.1.2.3. Определение активности ферментов
2.1.2.4. Определение количества метаболитов
2.1.2.5. Определение количества белка
2.1.2.6. Методы хроматографического разделения изоформ малатдегидрогеназы
2.1.2.7. Электрофоретические исследования
2.1.2.7.1. Определение гомогенности ферментов
2.1.2.7.2. Специфическое проявление МДГ
2.1.2.7.3. Определение молекулярной массы субъединиц фермента методом Бз-Ла ПААГ-электрофореза

пероксисомального /3-окисления насыщенных ЖК и при повышении уровня последних активируют гены, кодирующие соответствующие ферменты. При этом внутриклеточный уровень (/3-окисление ЖК регулируется цитохромом Р-450, локализующимся в мембранах пероксисом. Он играет основную роль в обеспечении жирнокислотного гомеостаза клеток, особенно при гипоксии, т.е. в условиях нарушения митохондриального /3-окисления ЖК. Пероксисомы играют важную роль не только в синтезе, но и в окислительной деградации и самих полиненасыщенных дикарбоновых ЖК, в результате которой может образоваться глюкоза. Следовательно, глюконеогенез из ЖК может осуществляться как через глиоксилатный цикл в самих пероксисомах, так и путем поставки из пероксисом в митохондрии /3-окисленных ЖК-субстратов.
Итак, на основании всех приведенных выше данных вполне правомочно утверждать, что на сегодняшний день имеются веские радиоизотопные и другие биохимические доказательства конверсии ЖК в углеводы (глюкозу и гликоген), происходящей в тканях млекопитающих и человека. А поскольку обратный процесс (конверсия глюкозы в ЖК) считается безукоризненно обоснованным, то из этого утверждения следует признание взаимообратимости и взаимозаменяемости в клетках и тканях высших организмов основных энергетических субстратов - ЖК и глюкозы.
На взаимосвязь жировых и углеводных отложений в клетках животных и человека обращали внимание уже при светооптическом исследовании тканей [21, 22], но осмысление функционального значения этой взаимосвязи стало возможным только с появлением электронной микроскопии. По нашим сведениям, наблюдали в клетках околоушных желез крыс ассоциацию жировых и гликогеновых скоплений с пероксисомами и предположили, что она отражает процесс образования гликогена из жира с помощью глиоксилатного цикла [22]. Был обнаружен с помощью электронной цитохимии гликоген в пероксисомах почек мышей, содержащихся на диете с