Свободнорадикальный гомеостаз в условиях ишемии-реперфузии головного мозга крыс при воздействии гуанидиновых производных

• Автор: Суховеева, Ольга Вадимовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 159 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Метаболизм головного мозга

1.1.1. Этиология и патогенез ишемии мозга 16 1Л .2. Реперфузия - восстановление или повреждение

церебральной ткани *

1.2. Роль свободнорадикального окисления в организме

1.2.1. Антиоксидантная система и её роль в гомеостазе

организма

1.2.1.1. Ферментативное звено антиоксидантной защиты

организма от окислительного стресса
1.2.1.2. Неферментативное звено антиоксидантной системы
1.2.2. Особенности окислительного стресса в мозге
1.3. Нейропротективная терапия
1.3.1. Испольвозание антиоксидантов при ишемии головного

мозга
1.4. Гуанидиновые производные
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Объект и методы исследования
2.1.1. Объект исследования
2.1.2. Методы исследования
2.1.2.1. Создание модели ишемии-реперфузии головного мозга у экспериментальных животных и введение веществ
протекторов 2
2.1.2.2. Исследование фрагментации ДНК с помощью
электрофореза в агарозном геле
2.1.2.3. Подготовка материала для исследования

2.1.2.4. Определение концентрации лактата в ткани головного мозга крыс
2.1.2.5. Определение количества пирувата в ткани головного мозга экспериментальных групп животных
2.1.2.6. Оценка оксидативного статуса
2.1.2.6.1. Определение содержания диеновых коньюгатов
2.1.2.6.2. Определение интенсивности процессов свободнорадикального окисления биосубстратов методом биохемилюминесценции
2.1.2.7. Определение концентрации восстановленного глутатиона
2.1.2.8. Определение концентрации цитрата
2.1.2.9. Определение активности ферментов
2.1.2.9.1. Определение активности супероксиддисмутазы
2.1.2.9.2. Определение активности каталазы
2.1.2.9.3. Определение активности НАДФ-зависимых 58 ферментов
2.1.2.9.4. Определение активности аконитатгидратазы
2.1.2.9.5. Определение активности цитратсинтазы
2.1.2.10. Определение концентрации белка
2.1.2.11. Выделение и очистка глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы из мозга крыс

2.1.2.11.1. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония

2.1.2.11.2. Гель-фильтрация на сефадексе
2.1.2.11.3. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе
2.1.2.12. Экстракция тотальной РНК тризольным методом
2.1.2.13. Электрофорез РНК

2.1.2.14. Обратная транскрипция
2.1.2.15. ПЦР-амплификация в режиме реального времени
2.1.2.16. Определение уровня экспрессии генов
2.1.2.17. Электрофорез ДНК
2.1.2.18. Статистическая обработка данных 68 ГЛАВА 3. ВОЗДЕЙСТВИЕ
ГУАНИДИНОВЫХПРОИЗВОДНЫХ НА ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ИШЕМИИ-РЕПЕРФУЗИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА У КРЫС
3.1 Оценка уровня энергетического обмена при действии, гуанидиновых производных в ткани головного мозга крыс при развитии ишемии-реперфузии.
3.2. Влияние бигуанидов на содержание диеновых конъюгатов в мозге и сыворотке крови крыс при ишемии-реперфузии головного мозга
3.3. Воздействие производных гуанидина на параметры биохемилюминесценции пи развитии ишемии-реперфузии головного мозга у крыс
3.4. Исследование фрагментации ДНК в мозге крыс в норме, при ишемии-реперфузии и при введении гуанидиновых производных
3.5. Изменение активности аконитатгидратазы под влиянием производных гуанидина при развитии ишемии-реперфузии головного мозга у крыс
3.6. Воздействие производных гуанидина на содержание цитрата при развитии ишемии-реперфузии головного мозга у крыс

1.3. Нейропротективная терапия
Сосудистые заболевания нервной системы считаются основной проблемой современной клинической неврологии. Интерес к этой проблеме объясняется большой заболеваемостью, нередко в молодом возрасте, высокой смертностью и инвалидностью [189]. В структуре смертности взрослого населения смертность от ишемии мозга в большинстве экономически развитых стран стоит на втором-третьем месте, составляя 12- 15% всех причин смерти. Показатели заболеваемости и смертности от инсульта в России являются одними, из'самых высоких в развитых странах мира. Общая летальность при инсульте составляет по различным данным от 25 до 54%, лишь 10-15% больных- после инсульта-возвращаются к прежнему труду, стойкая утрата трудоспособности (инвалидность) после инсульта доходит до 80%.
Поддержание адекватного функционирования головного мозга является сохранением человека и как биологической субстанции и, прежде всего, как социального индивида [6]. При этом постоянно- необходимо, помнить, что мозг не является изолированным от организма органом и эффективное влияние на церебральные структуры возможно только при системном комплексном воздействии на организменном, системном и клеточном уровне.
Одним из направлений специфической терапии при ишемии головного мозга является нейропротективная терапия. Современные методы церебропротекции включают использование АО и антигипоксантов, нейротрофических факторов, ингибиторов цитокинов и других веществ, способствующих поддержанию морфологически -функциональной активности церебральных структур [22 , 56, 135, 190].