Исследование изоферментов креатинфосфокиназы нервной ткани при ишемии мозга

• Автор: Сергеева, Татьяна Федоровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 152 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АДФ - аденозиндифосфат
АМФ - аденозинмонофосфат
АО А - антиоксидантная активность
АТФ - аденозинтрифосфаг
АФК — активные формы кислорода
в/б - внутрибрюшинно
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ГЭБ - гематоэнцефалический барьер
ДСИП - дельта-сон индуцирующий пептид
ДТТ - дитиотреитол
ИЭТ - изоэлектрическая точка
КФК - креатинфосфокиназа
Кр - креатин
КФ - креатинфосфат
МАО - моноаминооксидаза
миКФК - митохондриальная креатинфосфокиназа
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
НАДН - никотииамидадениндинуклеотид (восстановленный)
ГІК - протеинкиназа
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СЖК - свободные жирные кислоты
СОД — супероксиддисмутаза
СРО - свободнорадикальное окисление
ТАН - транслокатор адениловых нуклеотидов
ХЛ - хемилюминесценция
ЦП - церулоплазмин
цтКФК - цитоплазматическая креатинфосфокиназа ЭДТА - этилендиамингетрауксусная кислота

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Креатинфосфокиназная система клетки
1Л Л. Креатинфосфокиназная реакция
1 Л.2. Цитоплазматическая креатинфосфокиназа
1Л.З. Митохондриальная креатинфосфокиназа
1 Л.4. Функции креатинфосфокиназной реакции в клетке
1.2. Патобиохимические аспекты ишемического повреждения головного мозга
1.2.1. Процессы свободнорадикального окисления при ишемии головного мозга
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Постановка эксперимента. Моделирование экспериментальной патологии
2.2. Методы исследования
2.2.1 Выделение митохондриальной и цитоплазматической фракции мозга
2.2.2. Получение осадка митохондриальных мембран для изучения
каталитических свойств мембраносвязанной митохондриальной креатинфосфокиназы
2.2.3. Определение активности креатинфосфокиназы в мозге крыс
2.2.4 Определение кинетических характеристик креатинфосфокиназы
2.2.5. Диссоциация митохондриальной креатинфосфокиназы
2.2.6. Исследование интенсивности процессов свободнорадикального окисления В мозге методом индуцированной Н2О2 и Ре2+ хемилюм инесценции
2.2.7. Исследование влияния церулоплазмина и дельтарана на интенсивность свободнорадикального окисления и активность митохондриальной креатинфосфокиназы в ткани мозга
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Каталитические свойства изоферментов креатинфосфокиназы головного мозга интактных животных
3.1.1. Распределение активности изоферментов креатинфосфокиназы мозга интактных животных
3.1.2. Распределение олигомерных форм митохондриальной креатинфосфокиназы мозга интактных животных
3.1.3. Кинетические свойства митохондриальной и цитоплазматической
креатинфосфокиназы мозга интактных животных
3.2. Каталитические свойства изоферментов креатинфосфокиназы головного мозга животных при острой ишемии

3.2.1. Распределение активности изоферментов креатинфосфокиназы при острой ишемии мозга
3.2.2. Распределение олигомерных форм митохондриальной
креатинфосфокиназы в головном мозге животных при острой ишемии
3.2.3. Кинетическая характеристика митохондриальной креатинфосфокиназы при острой 30 минутной ишемии мозга
3.3. Каталитические свойства митохондриальной и цитоплазматической креатинфосфокиназы нервной ткани в динамике после острой ишемии мозга
3.3.1. Распределение активности изоферментов креатинфосфокиназы в динамике после острой ишемии головного мозга
3.3.2. Распределение олигомерных форм митохондриальной
креатинфосфокиназы мозга животных в динамике нарушения мозгового кровообращения
3.3.3. Кинетическая характеристика митохондриальной креатинфосфокиназы при 3 дневной ишемии мозга
3.4. Характеристика свободнорадикального окисления в головном мозге экспериментальных животных
3.4.1. Свободнорадикальное окисление в головном мозге интактных животных
3.4.2. Характеристика свободнорадикального окисления при острой ишемии головного мозга
3.4.3. Показатели свободнорадикального окисления в динамике ишемии головного мозга животных
3.5. Влияние церулоплазмина и дельтарана на состояние свободнорадикального окисления и активность митохондриальной креатинфосфокиназы в ткани мозга интактных животных и при острой ишемии
3.5.1. Влияние церулоплазмина на состояние свободнорадикального окисления и активность митохондриальной креатинфосфокиназы в ткани мозга интактных животных и при острой ишемии
3.5.2. Влияние дельтарана на состояние свободнорадикального окисления и активность митохондриальной креатинфосфокиназы в ткани мозга интактных
животных и при острой ишемии
4. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

При ишемии мозга и других органов митохондриальные мембраны наиболее подвержены действию СРО. Одной из основных мишеней окислительного стресса в мембранах митохондрий нервных клеток является кардиолипин (Addabbo et al., 2009). Кардиолипин (дифосфатидилглицерин) локализован исключительно в энергозапасающих мембранах митохондрий, он «фиксирует» цитохром с во внутренней мембране митохондрий, связан с порином, ТАН, гексокиназой и миКФК. Окисление кардиолипина приводит к высвобождению цитохрома с, активации каспаз и инициации апоптоза клеток (Valdez et al., 2004; Zenebe et al., 2007).
Получены доказательства того, что свойства и функции мембранных белков во многом зависят от их микроокружения, то есть от динамических свойств липидного матрикса мембраны (Гайнуллин, 1997; Гринштейн, Кост, 2001; Chopinean et ab, 1989). В то же время состав и конформационные изменения белков влияют на состояние мембранных липидов. Установлено, что белки, экранируя липиды, снижают повреждающее действие на них фосфолипаз, продуктов ПОЛ и других патологических факторов (Болдырев, 1990; Gil et ab, 1998). В связи с этим ряд исследователей (da-Silva et ab, 2004; Meyer et ab, 2006; Monge et ab, 2008) указывают на антиоксидантную функцию мембраносвязанной гексокиназы и миКФК, которые участвуют в структурировании мембраны митохондрий и поддержании мембранного потенциала.
Известно, что повышение уровня АФК вызывает не только повреждение мембранных структур клеток, но и является стимулом для индукции защитных систем организма (Скулачев, 2001; Жукова, 2005; Сазонтова, Архипенко, 2007; Vanden et ab, 1998; Maulik et ab, 1999; Semenza, 1999a, 1999b; Peng et ab, 2000; Clantz et ab, 2005; Karmen, 2005; Ramanathan et ab, 2005). Одним из важных следствий инициации редокс-сигнализации и АФК-опосредованной передачи сигнала является активация ядерных факторов транскрипции, принимающих непосредственное участие в активации генов, кодирующих различные защитные системы: антиоксидантную систему клеток, систему белков срочного ответа, которые могут синтезироваться при гипоксии и реоксигенации: NF-kB,