Особенности свободнорадикального окисления при травме опорно-двигательного аппарата в условиях экспериментальной гипергомоцистеинемии

• Автор: Кураян, Кристина Макаровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Молекулярные, клеточные и биохимические основы активации

свертывания крови

1.1.1. Молекулярная природа тромбоза

1.1.2. Этиопатогенегические факторы развития тромбоза

1.2. Гипергомоцистеинемия как фактор риска развития сосудистых патологий

1.2.1. Метаболизм гомоцистеина

1.2.2. Причины гипергомоцистеинемии и ее роль в развитии патологий ассоциированных с тромбозом

1.2.3. Влияние гомоцистеина на эндотелий сосудов

1.3. Свободнорадикальные процессы в этиологии тромбооклюзивных патологий
1.3.1. Оксидативный стресс как основной фактор развития тромбооклюзивных патологий
1.3.2. Источники АФК и свободнорадикальное окисление биополимеров
1.3.3. Система антиоксидантной защиты
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования и постановка эксперимента
2.1.1. Получение плазмы крови, суспензии эритроцитов и гемолизата
2.1.2. Приготовление гистологического материала
2.2. Методы исследования
2.2.1. Микроскопия гистологических препаратов
2.2.2. Хемилюминесцентный анализ плазмы крови в системе Н202- люминол
2.2.3. Получение хлороформных липидных экстрактов
2.2.4. Определение содержания диеновых конъюгатов (ДК)
2.2.5. Определение содержания продуктов ПОЛ, реагирующих
с 2-тиобарбитуровой кислотой
2.2.6. Определение содержания шиффовых основании (ШО)
2.2.7. Определение активности супероксиддисмутазы и супероксидустраняющей активности (СОД, СУ А)
2.2.8. Определение активности каталазы
2.2.9. Определение суммарной пероксидазной активности (СПА)
2.2.10. Определение активности глутатионпероксидазы (ГПО)
2.2.11. Определение активности глутатионредуктазы (ГР)
2.2.12. Определение содержания восстановленного глутатиона (С8Н)
2.2.13. Определение содержания гомоцистеина в плазме крови
2.2.14. Определение содержания гемоглобина в гемолизате эритроцитов и внеэритроцитарного гемоглобина в плазме крови
2.2.15. Определение содержания общих липидов
2.2.16. Определение общего белка методом Lowry в модификации Shacterle-Pollack.
2.3. Статистическая обработка материалов исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Интенсивность свободнорадикального окисления в крови крыс при травме и в условиях ГГЦ
3.2. Состояние интегрального показателя стабильности мембран в плазме крови крыс при травме и в условиях ГГЦ
3.3. Состояние антиоксидантной системы у крыс при травме и в условиях ГГЦ
3.4. Состояние глутатионовой системы у крыс при травме и в условиях ГГЦ
3.5. Изменение содержания ГЦ в плазме крови крыс при травме и в условиях гипергомоцистеинемии
3.6. Морфологические, морфометрические и гистологические доказательства развития экспериментального тромбоза в условиях ГГЦ
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АКР - активные кислородные радикалы
АОЗ - антиоксидантная защита
АПС - активированный протеин С
АТ III - антитромбин III
АФК - активные формы кислорода
ВМК - высокомолекулярный кининоген
ВМКа - активированный высокомолекулярный кининоген
ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин
ГГЦ - гипергомоцистеинемия
ГПО — глутатионпероксидаза
ГР — глутатионредуктаза
ГЦ - гомоцистеин
ГЦК - гомоцистеиновая кислота
ДК - диеновые коньюгаты
ИБС - ишемическая болезнь сердца
ИПТФ - ингибитор превращения тканевого фактора
МДА - малоновый диальдегид
МТГФР - метилентетрагидрофолат-редуктаза
5-МТГФР - 5-метилентетрагидрофолат-редуктаза
ОС - оксидативный стресс
ПДФ - продукты деградации фибрина
ПК - прекалликреин
ПНЖК - полиненасьпценные цепи жирных кислот ПОЛ - перекисное окисление липидов ПРФ — продукты расщепления фибрина ПС - протеин С ПБ - протеин Б
СОД — супероксиддисмутаза СПА - суммарная пероксидазная активность СРО - свободнорадикальное окисление СРП - свободнорадикальные процессы СРР - свободнорадикальные рекции ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания

Недостаток поступления облигатных антиоксидантов приводит к нарушению нормальной упаковки мембранного бислоя, что может вызвать повреждение и мембраносвязанных белков (Янковский О.Ю., 2000). Один из главных дефектов связан с инактивацией ион-транспортных ферментов, в активный центр которых входят тиоловые группы, в первую очередь Са2+-АТФ-азы. Второй результат ПОЛ связан с тем, что продукты пероксидации обладают способностью непосредственно увеличивать ионную проницаемость липидного бислоя. Это приводит к потере митохондриями способности осуществлять синтез АТФ, и клетка оказывается в условиях энергетического голода (Владимиров Ю.А. и др., 1972). Третий результат пероксидации — это уменьшение стабильности липидного слоя, формирование электрического пробоя мембраны собственным мембранным потенциалом, с последующей потерей мембраной ее барьерных функций и, как следствие, гибели клетки (Владимиров Ю.А., 1987).
1.3.3. Система антиоксидантной защиты
Многоуровневая система антиоксидантной защиты направлена на поддержание целостности организма и химического постоянства его внутренней среды. Эта система включает различные молекулярные факторы, способные как предотвращать образование свободных радикалов и инициацию ими цепных реакций, так и ликвидировать уже образовавшиеся субстанции этой природы (Зенков Н.К. и др., 2001).
Существует множество классификаций систем АОЗ. По одной из них антиоксиданты разделяются на 4 класса: ферментативные, неферментативные, соединения комплексоны и гидрофобные мембранотропные соединения (Владимиров Ю.А. и др., 1991).
Ферментативные антиоксиданты являются средством внутриклеточной защиты и характеризуются высокой специфичностью действия, направленного против строго определённых форм свободных радикалов, специфичностью органной и клеточной локализации, а также наличием в активном центре металлов переменной валентности (Си, 7.п, Мп, Ре, Бе) (Меньшикова Н.К., Зенков Е.Б., 1993; Ме1оу Б., 2002). К основным ферментам, обеспечивающим антиоксидантный статус организма относится семейство супероксиддисмутаз, каталаза, глутатионзависимые пероксидазы и трансферазы (Менщикова Е.Б. и др., 2006).
Супероксиддисмутаза (СОД) (КФ 1.15.1.1) (Дубинина Е.Е., 1995) катализирует реакцию дисмутации супероксидного анион-радикала (Ог‘*):
Ог’* + Ог’* + 2Н+ —> Н2О2 + О2 (скорость реакции велика ку ~ 2* 109 М''с'')
У человека ген СшТл-СОД локализован в XXI хромосоме (Дубинина Е.Е. и др.,