Роль аналога аденозина в изменении фенотипических свойств дендритных клеток человека моноцитарного происхождения при бронхиальной астме

• Автор: Горемыкин, Константин Викторович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 183 с. : 8 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Роль аденозиновых рецепторов в процессе воспаления

1.1.1. Функции аденозина в организме

1.1.2. Строение и функции аденозиновых рецепторов

1.1.2.1. Классификация аденозиновых рецепторов

1.1.2.2. Эффекты активации аденозиновых рецепторов типа А|

1.1.2.3. Эффекты активации аденозиновых рецепторов типа А2а

1.1.2.4. Эффекты активации аденозиновых рецепторов типа Аз
1.1.2.5. Эффекты активации аденозиновых рецепторов типа А2В
1.1.3. Роли аденозиновых рецепторов при различных патологических состояниях и болезнях
1.1.3.1. Роли аденозиновых рецепторов при ишемии
1.1.3.2. Роли аденозиновых рецепторов при артрите
1.1.3.3. Роли аденозиновых рецепторов при сепсисе
1.1.3.4. Роли аденозиновых рецепторов при воспалительных болезнях кишечника..
1.1.3.5. Роли аденозиновых рецепторов в развитии и поддержании бронхиальной астмы..
1.1.4. Лиганды аденозиновых рецепторов
1.2. Дендритные клетки: разновидности и роль в воспалении
1.2.1. Классификации моноцитов и дендритных клеток
1.2.1.1. Субпопуляции моноцитов
1.2.1.2. Субпопуляции дендритных клеток
1.2.3. Наличие аденозиновых рецепторов на моноцитах
1.2.4. Наличие аденозиновых рецепторов на дендритных клетках
1.3. Бронхиальная астма как пример воспалительного процесса

1.3.1. Недостатки современных схем лечения бронхиальной астмы при помощи фармацевтических препаратов
1.3.2. Биохимические факторы развития бронхиальной астмы
1.3.3. Участие клеток воспаления в развитии бронхиальной астмы
1.3.4. Роль медиаторов воспаления при бронхиальной астме
1.4. Использование компьютерного моделирования для изучения лиганд-рецепторных взаимодействий
1.4.1. Компьютерное молекулярное моделирование лиганд-рецепторных взаимодействий
1.4.1.1. Квантовая механика
1.4.1.2. Молекулярная механика
1.4.2. Компьютерные модели молекул белка
1.4.3. Компьютерные модели аденозиновых рецепторов и их применение для изучения взаимодействия с известными лигандами
1.4.4. Построение компьютерной модели аденозинового рецептора типа А2В
1.4.5. Построение компьютерных моделей низкомолекулярных веществ
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Организация исследования
2.2. Клиническая характеристика обследованных пациентов
Критерии включения во все группы:
Критерии включения в группу 1 (больные БА легкой и среднетяжелой степеней тяжести):..
Критерии включения в группу 2 (больные БА тяжелой степени тяжести):
Критерии включения в группу 3 (контрольная):
Критерии исключения для всех групп:
2.3. Лабораторные методы культивирования и исследования дендритных клеток, полученных из моноцитов периферической крови людей, страдающих бронхиальной астмой различной степени тяжести, а также практически здоровых людей
2.3.1. Взятие периферической крови у обследуемых
2.3.2. Выделение мононуклеаров из периферической крови обследуемых на градиенте плотности фиколла
2.3.3. Выделение моноцитов из мононуклеарной фракции
2.3.4. Контроль чистоты выделения моноцитов — С014+ клеток
2.3.5. Дифференцировка моноцитов в дендритные клетки in vitro
2.3.6. Определение экспрессии клеточных маркеров CDla, CD14, CD
2.3.7. Выделение суммарной РЖ клетки (общей РЖ)
2.3.В. Синтез комплементарной ДЖ (кДЖ)
2.3.9. Количественная полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени
2.3.10. Определение синтеза ИЛ-8, ИЛ-6, ФРЭС, культурами дендритных клеток посредством твердофазного иммуноферментного анализа
2.4. Компьютерные методы исследования
2.4.1. Аминокислотные последовательности рецепторов
2.4.2. Моделирование рецепторов по гомологии при помощи программного пакета MODELLER
2.4.3. Построение и оптимизация трехмерных компьютерных моделей низкомолекулярных веществ - лигандов аденозинового рецептора
2.4.4. Расчет лигавд-рецепторных взаимодействий
2.5. Методы статистической обработки полученных результатов
Глава 3, Результаты собственных исследований
3.1. Цитофлуориметрическая характеристика моноцитарной фракции, выделенной из периферической крови обследуемых
3.2. Экспрессия антигенного фенотипа (CDla'CD14+CD209+) на дендритных клетках обследуемых
3.3. Уровни мРНК аденозиновых рецепторов типов Ац А2а, А2в, Аз и паракринных факторов (интерлейкина 6, интерлейкина 8, фактора роста эндотелия сосудов) в дендритных клетках обследуемых
3.4. Уровни паракринных факторов (интерлейкина 6, интерлейкина 8, фактора роста эндотелия сосудов) в культуральной среде дендритных клеток, полученных от обследуемых
3.5. Сопоставление количеств мРЖ аденозиновых рецепторов в дендритных клетках с функциональными характеристиками обследуемых (больных бронхиальной астмой)
3.6. Сопоставление уровней мРЖ паракринных факторов в дендритных клетках с характеристиками обследуемых, больных бронхиальной астмой
3.7. Сопоставление количества паракринных факторов в культуральной среде дендритных клеток с функциональными характеристиками обследованных (больных бронхиальной астмой)

развиваются главным образом из стволовых клеток через стадии циркулирующих клеток-предшественников макрофагов и ДК [Naik S. Н. et al, 2006; Varol С. et al, 2007; Yona S., 2010].
При культивировании in vitro в присутствии ГМ-КСФ и ИЛ-4 моноциты приобретают специфические маркеры и особенности незрелых миелоидных ДК (в том числе CD 1а), при этом теряя типичные для моноцитов и макрофагов маркеры (в том числе CD14) [Sallusto F., 1994; Chapuis F.,
1997]. Тем не менее, моноциты обладают определенной пластичностью в выборе направления дифференцировки [Peters J. Н., 1996]. М-КСФ, ИЛ-10, ИЛ-6, секретируемые фибробластами или эпителиальными клетками, направляют дифференцировку моноцитов в макрофаги даже в присутствии ГМ-КСФ и ИЛ-4 [Palucka К. A. et al, 1998; Rieser С. et al, 1998]. И наоборот, полностью дифференцированные макрофаги в присутствии ГМ-КСФ и ИЛ-4 приобретают некоторые черты ДК [Zou W., 2000; Chapuis F., 1997].
Внутриклеточные сигнальные пути, опосредующие^, данные направления дифференцировки, определены не полностью. Процессы дифференцировки в ряде типов клеток регулируются сигнальными путями с участием циклических нуклеотидов. Было показано, что цАМФ участвует в регуляции дифференцировки ДК [Giordano D. et al, 2003].
Простагландин Е2, повышающий концентрацию внутриклеточного цАМФ в ходе дифференцировки моноцитов в ДК, блокирует одновременно как понижение количеств CD 14, так и повышение - CD 1а. При этом способность ДК презентировать антиген и активировать наивные Т-лимфоциты остается неизменной. Клетки, подверженные действию простагландина Е2 при дифференцировке, теряют способность производить ИЛ-12, подтверждая, что индуцирующие накопление цАМФ факторы обладают способностью направлять иммунный ответ в направлении Th2 [Giordano D. et al, 2003].