Молекулярно-биологический анализ функциональной асимметрии пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae в условиях стресса

• Автор: Сорокин, Максим Игоревич
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Характеристика дрожжей как модельного объекта эукариотической клетки

2. Дифференцировка дрожжей как следствие асимметрии деления

3. Асимметричность деления дрожжей Saccharomyces cerevisiae

4. Асимметричное наследование макромолекулярных комплексов клетками S. cerevisiae

5. Различие длин фаз клеточного цикла материнской и дочерней

клетки S. cerevisiae

6. Различие профилей экспрессии материнской и дочерней

клетки S. cerevisiae

7. Типы спаривания дрожжей и НО-эндонуклеаза
8. Механизм формирования асимметрии между
материнской и дочерней клеткой дрожжей
9. Асимметричное деление и репликативная продолжительность жизни
10. Наследование белковых агрегатов клетками дрожжей S. cerevisiae.
11. Репликативная продолжительность жизни дрожжей Saccharomyces cerevisiae
12. Методы определения репликативной продолжительности жизни дрожжей
13. Генетика репликативного старения дрожжей
14. Влияние АФК и митохондрий на репликативную продолжительность жизни дрожжей
15. Асимметричное наследование митохондрий клетками S. cerevisiae
16. Влияние вакуолярного pH на функцию митохондрий и репликативную продолжительность жизни дрожжей
17. Изменения в клетках дрожжей, происходящие на ранних этапах репликатвного старения

18. Дифференцировка дрожжей в составе микроколонии
19. Дифференцировка дрожжей в стационарной фазе роста
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Объект исследования и методы культивирования
2. Амплификация дрожжевых генов при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР)
3. Горизонтальньтй гель-электрофорез ДНК
4. Выделение суммарной ДНК из дрожжей S. cerevisiae
5. Выделение плазмидной ДНК из E.coli методом щелочного лизиса
6. Обработка ДНК эндонуклеазами рестрикции
7. Выделение ДНК из агарозного геля
8. Реакция лигирования
9. Приготовление электрокомпетентных клеток E.coli и электропорация
10. Трансформация дрожжей
11. Получение мутантных лилий дрожжей
12. Получение линии клеток, в которых ген URA3 находится под контролем НО промотора
13. Измерение устойчивости клеток S. cerevisiae К6001 к стрессу, вызванному низким pH, в зависимости от репликативного возраста..
14. Измерение устойчивости клеток S. cerevisiae к стрессу в зависимости
от репликативного возраста
15. Измереште доли клеток, образовавших споры на бедной среде, в зависимости от репликативного возраста
16. Измерение доли клеток, образовавших псевдогифу в ответ на бутанол, в зависимости от репликативного возраста
17. Прочие микроскопические методы
18. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Возрастное распределение культуры клеток дрожжей

2. Устойчивость клеток дрожжей к стрессу в зависимости от репликативного возраста
3. Зависимость стрессоустойчивости клеток дрожжей от размера
4. Стресс-специфический характер зависимости устойчивости клеток дрожжей в зависимости от репликативного возраста
5. Активация транскрипционных факторов ответа на стресс в зависимости от репликативного возраста
6. Характеристика ранневозрастных изменений клеточных органелл
S. cerevisiae
7. Поиск генов, связанных с ранним снижением стрессоустойчивости клеток дрожжей
8. Способность к дифференцировке клеток дрожжей в зависимости от репликативного возраста
9. Получение и описание штамма, в котором оротидин 5’-фосфат декарбоксилаза находится под контролем НО промотора
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

■ bud ■mother
T, OT

T3 >-

о ■ 1 з о 1 ■о Ä

generations
Рисунок 15. Митохондрии наследуемые дочерней клеткой имеют меньший окислительный потенциал, чем материнские клетки. По оси X - количество почечных рубцов, по Y — соотношеие восстановленного mito-roGFP к окисленному. Источник -McFaline-Figueroa et al., 2011.
При этом делеция MMR], который в норме локализован в полюсе роста дочерней клетки и отвечает за наследование митохондрий, приводила к тому, что нарушался контроль качества митохондрий. Более того, такая делеция приводила к появлению двух типов клеток: с большой и малой репликативной продолжительностью жизни (рисунок 16).