Влияние вируса простого герпеса и цитомегаловируса на мужские половые клетки и сперматогенез при экспериментальной инфекции in vitro и in vivo

• Автор: Тюленев, Юрий Александрович
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 151 с. : ил.

Содержание:

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Общая характеристика герпесвирусов

1Л. Таксономическое положение семейства Herpesviridae

1.2. Структура вириона герпесвирусов

1.3. Репликативный цикл герпесвирусов

Глава 2. Общие понятия о сперматогенезе

2.1. Строение мужских гонад

2.2. Мужские половые клетки

2.3. Кинетика сперматогенеза
2.4. Апоптоз во время первой волны сперматогенеза
2.5. Органотипическая культура мужских гонад как модель
для изучения сперматогенеза in vitro
Глава 3. Герпесвирусная инфекция мужских гонад
3.1 .Частота встречаемости герпесвирусов в эякуляте
3.2. Влияние герпесвирусов на показатели спермограммы
3.3. Изучение влияния герпесвирусов на сперматогенез на экспериментальных моделях
3.4. Внутригаметная герпесвирусная инфекция
3.5. Выявление герпесвирусов в подвижных сперматозоидах
3.6. Возможность оплодотворения яйцеклетки инфицированным
сперматозоидом
3.7. Заключение по обзору литературы
ДАННЫЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 4. Материалы и методы
4.1. Основные реактивы
4.2. Пациенты
4.3. Животные
4.4. Клеточные культуры
4.5. Вирусы
4.6. Определение инфекционной активности ЦМВ
4.7. Определение инфекционной активности ВПГ
4.8. Получение органной культуры мужских гонад
4.9. Заражение органной культуры мужских гонад
4.10. Заражение лабораторных животных
4.11. Спаривание и оценка фертильности
4.12. Оценка возможности вертикальной передачи ВПГ
4.13. Быстрый культуральный метод (БКМ)
4.14. ПЦР в реальном времени
4.15. Гистологический анализ
4.16. Иммунопероксидазная окраска
4.17. Электронная микроскопия
4.18. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 5. Герпесвирусная инфекция мужских гонад в
органной культуре in vitro
5.1. ВПГ -инфекция семенника половозрелой мыши
5.1.1. Динамика ВПГ-инфекции в органной культуре семенника половозрелой мыши
5.1.2. Локализация ВПГ в органной культуре семенника половозрелой мыши
5.1.3. Влияние ВПГ на половые клетки половозрелой мыши
5.2. ВПГ-инфекция яичка человека in vitro
5.2.1. Динамика ВПГ-инфекции в органной культуре яичка человека
5.2.2. Локализация ВПГ в органной культуре яичка человека
5.2.3. Влияние ВПГ на половые клетки человека
5.3. ЦМВ-инфекция яичка человека in vitro

5.3.1. Динамика ЦМВ-инфекции в органной культуре яичка человека
5.3.2. Локализация ЦМВ в органной культуре яичка человека
5.3.3. Влияние ЦМВ на половые клетки человека 85 Глава 6. Герпесвирусная инфекция мужских гонад
неполовозрелых мышей in vitro и in vivo
6.1. Герпесвирусная инфекция неполовозрелых мужских
гонад in vitro
6.1.1. Динамика ВПГ-инфекции в органной культуре
семенника 9- и 17-дневной мыши
6.1.2. Локализация ВПГ в органной культуре семенника 9- и 17-дневной мыши
6.1.3. Влияние ВПГ на половые клетки 9- и 17-дневной мыши
6.2. Влияние вируса простого герпеса на развитие мужских гонад
при заражении животных в препубертатном периоде
6.2.1а. Динамика ВПГ-инфекции при заражении мыши в препубертатном периоде
6.2.16. Динамика ВПГ-инфекции семенников
6.2.2. Локализация ВПГ в семенниках при заражении мыши в препубертатном периоде
6.2.3. Влияние ВПГ на половые клетки in vivo при заражении мыши в препубертатном периоде
6.3. Изучение фертильности мышей при заражении самцов ВПГ в препубертатном периоде
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Китае [224]; 25% - в США [219]; 33% - на Тайване [181]. Аналогично частота выявления ДНК ВПГ в эякуляте бесплодных мужчин составляет 3,2-3,7%о в Германии [31]; 4,8% - в Китае [224]; 2,1-49,5%> - в Греции [111; 114; 150] и 24% - в Японии [79].
Указанные сложности интерпретации результатов выявления герпесвирусов были учтены в ходе проведения в 2005-2008 гг. в России масштабного исследования маркеров ВПГ и ЦМВ в эякуляте 808 мужчин [9]. Комплексное применение быстрого культурального метода (БКМ), ПЦР и ПЦР in situ позволило выявить ВПГ у 27,2% обследованных мужчин, ЦМВ - у 8,8%о . Одновременно маркеры ВПГ и ЦМВ были обнаружены в 4,4% случаев. Сравнительный анализ показал, что герпесвирусы чаще выявляются в эякуляте с декабря по февраль по сравнению с остальными месяцами года: 34% против 24,5% для ВПГ (р=0,019) и 15,7% против 6,8% для ЦМВ (р=0,007), соответственно. Обнаруженные сезонные колебания, возможно, связаны с изменениями температуры окружающей среды и/или отражают зимнюю иммунодепрессию, вследствие чего происходит реактивация герпесвирусов. Данные о сезонных колебаниях частоты выявления герпесвирусов имеют важное клиническое значение, поскольку дают возможность уменьшить риск горизонтальной и вертикальной передачи ВПГ и ЦМВ при планировании естественной беременности, а также при лечении бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).
Важное значение имеют данные о более высокой частоте выявления инфекционно активного ВПГ у пациентов с бесплодием по сравнению со здоровыми мужчинами как в цельном эякуляте (31% против 17%), так и во фракции подвижных сперматозоидов (30% против 8%) [9]. В двух аналогичных исследованиях также показано, что частота встречаемости ВПГ выше в эякуляте пациентов с нарушениями фертильности по сравнению со здоровыми мужчинами. Borai et al. выявляли ДНК ВПГ в 24% образцов эякулята мужчин с бесплодием, но не обнаружили вирусной ДНК в