Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции

• Автор: Филатова, Елена Владиславовна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 155 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика болезни Паркинсона

1.1.1. Клиническая картина болезни Паркинсона

1.1.2. Классификация болезни Паркинсона

1.1.3. Нейропатология и течение болезни Паркинсона

1.2. Генетические причины развития болезни Паркинсона

1.2.1. Гены моногенных форм болезни Паркинсона

1.2.1.1. Ген альфа-синуклеина (SNCA)

1.2.1.2. Ген паркина (PARK2)
1.2.1.3. Ген PTEN-индуцируемой протеин киназы (PINK1)
1.2.1.4. Ген белка DJ-1 (PARK7)
1.2.1.5. Г ен дардарина (LRRK2)
1.2.1.6. Ген С-концевой убиквитин-гидролазы 1 (UCHL1)
1.2.1.7. Ген АТФазы 13А2 (АТР13А2)
1.2.2. Генетический анализ болезни Паркинсона как ключ к этиопатогенезу заболевания
1.3. Использование ДНК микрочипов при изучении болезни Паркинсона
1.4. Анализ изменения транскриптома при болезни Паркинсона
1.4.1. Анализ экспрессии генов в тканях головного мозга
1.4.2. Анализ экспрессии генов в периферической крови
1.5. Современные подходы к диагностике ранних стадий болезни Паркинсона
1.5.1. Нейровизуализационные методы исследования
1.5.2. Идентификация нарушений обоняния
1.5.3. Парадоксальный сон без мышечной атонии

1.5.4. Обстипация как маркер ранних стадий болезни Паркинсона
1.5.5. Биохимические маркеры в гуморальных средах
1.5.6. Молекулярно-генетические подходы к клинической и доклинической диагностике болезни Паркинсона
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Общая характеристика анализируемых выборок
2.2. Молекулярно-генетические методы анализа
2.2.1. Выделение геномной ДНК и тотальной РНК из цельной крови человека
2.2.2. Анализ экспрессии генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA, ST
2.2.2.1. Полимеразная цепная реакция обратной транскрипции
2.2.2.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
2.2.3. Анализ ДНК-микрочипов с использованием технологии APEX
2.2.3.1. Полимеразная цепная реакция
2.2.3.2. Очистка и концентрирование продуктов ПЦР
2.2.3.3. Фрагментация продуктов ПЦР
2.2.3.4. Полимеразная реакция удлинения праймера на микрочипе
2.2.4. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов в гене LRRK2.
2.2.4.1. Полимеразная цепная реакция и гидролиз продуктов ПЦР специфическими рестрикционными
эндодезоксирибонуклеазами
2.2.4.2. Анализ продуктов ПЦР и продуктов гидролиза ампликонов методом электрофореза в агарозном геле
2.2.5. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов в генах PARK2, SNCA, WNT

2.2.5.1. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
2.3. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Анализ толковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов
в генах при болезни Паркинсона
3.1.1. Анализ толковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов с помощью ДНК-микрочипа
3.1.2. Анализ отобранных однонуклеотидных полиморфизмов в генах LRRK2 и PARK
3.1.3. Анализ дополнительных однонуклеотидных полиморфизмов в генах SNCA и МАРТ
3.2. Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ,
PARK2, SNCA, ST
3.2.1. Анализ изменения экспрессии генов SLC6A3, МАРТ и PARK
3.2.2. Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SNCA и ST13..
3.2.2.1. Анализ изменения экспрессии гена GSK3B
3.2.2.2. Анализ изменения экспрессии гена SNCA
3.2.2.3. Анализ изменения экспрессии гена ST
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

рассматривать как предрасполагающий фактор развития БП (Luoma и др.,
2007).
О роли митохондриальной дисфункции в патогенезе БП говорит также выявление нескольких семей с БП, наследуемой по материнской линии (Wooten и др., 1997). Об этом же также свидетельствует описанная позже (van der Walt и др., 2003) ассоциация между митохондриальными митотипами и риском развития спорадической БП. Авторами было показано, что у европейцев с митотипами J риск развития заболевания значительно ниже, чем у носителей самого частого в Европе митотипа Н. Другим ассоциированным с развитием БП вариантом митохондриальной ДНК является полиморфизм 10398G, влияющий на активность NADH-дегидрогеназы 3 (van der Walt и др., 2003).
В современную схему патогенеза БП органически встраиваются и. известные факторы риска развития спорадической формы БП - такие как возраст. Влияние возраста может быть связано с накоплением у лиц пожилого возраста соматических мутаций в митохондриальной ДНК. Дофаминергические нейроны чрезвычайно чувствительны к соматическим мутациям в мтДНК: если доля мутантной мтДНК составляет 60% и более, митохондрии не могут обеспечить клетку достаточным количеством митохондриальных белков. Это приводит к функциональной
недостаточности дыхательной цепи нейрона (Ekstrand и др., 2007). Роль
накопления соматических мутаций в мтДНК в патогенезе БП доказывается более высоким содержанием мутантных молекул мтДНК у больных БП по сравнению со здоровыми людьми того же возраста (Bender и др., 2006).
К развитию БП может также приводить и снижение синтеза АТФ митохондриями по двум механизмам - через снижение уровня АТФ-зависимой протеасомной деградации белков и через повышение уровня свободных радикалов в клетке в условиях дисфункции
электронотранспортной цепи митохондрий. Повышение же уровня
свободных радикалов приводит к снижению активности иротеасомного