Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Пугач, Ксения Сергеевна
03.01.03
Кандидатская
2011
Москва
101 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
Оглавление
Список сокращений
Обзор литературы
Трансформация
Конъюгация
Трансдукция
Лизогенная конверсия
Бактериофаги и микроэволюция бактерий
CRISPR системы иммунитета
Распространение и структура CRISPR кассет
Cas белки
Механизм действия CRISPR систем
Адаптация
Экспрессия
Интерференция
Заключение
Введение
Материалы и методы
Бактериальные штаммы
Плазмиды
Питательные среды
Селективные антибиотики
Трансформация клеток Escherichia coli
Выделение плазмиды
Рестрикция
Извлечение фрагментов ДНК из агарозы
Лигирование ДНК
Оценка активности предполагаемого промотора
Обработка ДНКазой
Обратная транскрипция
5' RACE
Транскрипция in vitro
Секвенирование
Сайт-направленный мутагенез
Выделение РНК
Мечение олигонуклеотидов
Нозерн-блот для коротких РНК
Нозерн-блот длинных РНК
Результаты и обсуждение
Детекция коротких РНК, соответствующих кассетам CRISPR I, CRISPR II
и CRISPR III E. coli K12
Увеличение количества CRISPR РНК в KEIO-мутантах связано с повышенной экспрессией белка CasE
Определение положения промоторов CRISPRI и CRISPR II кассет
Экспериментальная система для изучения встраивания новых
CRISPR спейсеров
Определение последовательности РАМ для E. coli К12
Определение набора Cas белков, необходимых для встраивания новых
спейсеров
Встраивание новых спейсеров происходит в клетках с делецией
гена hns
Выводы
Список публикаций по теме диссертации
Список цитируемой литературы
Приложение
Приложение
Приложение
CRISPR/Cas локусы Streptococcus pyogenes относятся к Группе II по классификации Makarova и сотр. В геноме этого микроорганизма отсутствуют гены casô, casôf (csy4) и casôe (casE, cse3), ответственные за процессинг пре-крРНК в других системах. Группой под руководством Charpentier было обнаружено, что процессинг пре-крРНК в этой системе осуществляет белок Cas9 (Csnl, Csxl2) в комплексе с клеточной РНКазой III и малой некодирующей РНК tracrRNA [105]. Молекулы tracrRNA комплементарно связываются с последовательностями повторов в пре-крРНК, а РНКаза III в присутствии Cas9 разрезает дуплекс с образованием фрагментов CRISPR РНК длиной 66 нт, содержащих последовательность спейсера, фланкированную повторами. Эти фрагменты затем процессируются с образованием зрелой крРНК длиной 39-42 нт (Рис. 3). Механизм этого более глубокого процессинга пока не известен.
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Использование циркулирующих ДНК и мРНК для неинвазивного пренатального определения пола, резус-фактора и диагностики синдрома Дауна у плода | Благодатских, Екатерина Григорьевна | 2010 |
Системы клонирования и экспрессии целевых генов и анализ биологических функций синтезированных рекомбинантных белков | Белжеларская, Светлана Николаевна | 2011 |
Роль апоптоза в трансформации опухолей : новые подходы к терапии глиом | Павлюков, Марат Самвелович | 2019 |