Кристаллизация мембранных белков методом in meso

• Автор: Моисеева, Екатерина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1Л Классический метод кристаллизации мембранных белков

1.2 Кристаллизация in mesa и фазовая диаграмма моноолеина

1.3 Гипотетический молекулярный механизм кристаллизации мембранных

белков в кубической фазе

1.4 Теоретическое представление о кристаллизации in те so

1.5 Классификация и свойства детергентов

1.6 Влияние детергентов на липидную мембрану
1.7 Влияние детергентов на фазовое поведение системы моноолеин/вода
1.8 Структура и кристаллы, выращенные при кристаллизации in mesa
1.9 7з-фаза
1.10 Кристаллизация из бицелл
1.11 Кристаллизация из везикул
1.12 Бактериородопсин
1.13 Двойникование кристаллов
1.14 Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Выделение и очистка бактериородопсина
2.1.1 Материалы для культивирования бактерий и выделения бактериородопсина
2.1.2 Культивирование бактерий
2.1.3 Выделение пурпурных мембран
2.1.4 Выделение и солюбилизация бактериородопсина
2.1.5 Определение концентрации и качества бактериородопсина

2.1.6 Электрофоретическое разделение белков
2.1.7 Определение концентрации детергента
2.1.8 Дополнительная очистка солюбилизированного бактериородопсина.
Метод повышения качества БР
2.2 Кристаллизация бактериородопсина
2.2.1 Материалы для кристаллизации
2.2.2 Кристаллизация в мостиках методом диффузии паров воды
2.2.3 Кристаллизация бактериородопсина из пурпурных мембран в мезофазе
моноолеина
2.2.4 Отбор и подготовка кристаллов для кристаллографических экспериментов
2.3 Кристаллографические измерения и обработка рентгеновских данных
2.3.1 Тестовые измерения и определение фактора двойникования кристаллов
2.3.2 Установка для рентгеновской кристаллографии белков
2.3.3 Выбор стратегии измерений
2.3.4 Обработка рентгеновских данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМА КРИСТАЛЛИЗАЦИИ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ МЕТОДОМ IN MESO
3.1 Дополнительная очистка солюбилизированного белка
3.2 Кристаллизация БР из пурпурных мембран, минуя стадию солюбилизации
3.3 Поведение кристаллизационной системы при изменении объемного
соотношения белковый раствор / липид
3.4 Поведение кристаллизационной системы при добавлении различного рода
добавок
Сравнительный анализ кристаллизации бактериородопсина с

использованием п-октил-рМУгигокопиранозида и п-октил-ß-D-тиоглюкопиранозида
3.6 Исследование кристаллизации БР с добавлением детергентов из семейства
пнокопиранозидов с различными гидрофобными хвостами

3.7 Исследование кристаллизации БР с добавлением детергентов из других
семейств с различными гидрофобными хвостами
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. БАКТЕРИОРОДОПСИН
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ РАБОТЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

A. Бактериородонсин (//. salinarum), 1М0К
1,43 Ä

a = 61,18, b = 61,18, с = 111,15 а = 90,00, ß = 90.00. у = 120
Б. Галородопсин (И. salinarum), 2.1 AF
1,70 Ä

а = 94,47, b = 94,47, с = 157,14 а = 90.00. ß = 90,00, у =120
B. Сенсорный родопсин 11 в комплексе с трансдыосером (Л. pharaonis), 11I2S
а = 124,30. b = 46,96, с = 53,84 а = 90,00. ß = 90,00, у = 90
Г. ОрсА (/V. meningitidis), 2VDF
1.95 Л
Р2,2
a = 37,86, b = 42,50, с = 150.30 а = 90,00, Р = 90,00, у = 90
Д. Btuli (E. colli. 2C.CF
1.95 Ä
Р2,2
а = 72,61, b = 80,88, с= 118,68 а = 90,00, Р = 90,00. у = 90
E. LHI1 (Kps. acidophila)
2,45 Ä

а = 81,44. b= 126.38,с = 129,71 а = 90,00, ß = 90,00, у
Ж. Сенсорный родопсин И lAnabaena sd.)
2,00 А
С222,
а= 103.10. b = 116,51, с = 56,19 а = 90,00. р = 90,00, у = 90
1, фотосннтетический реакционный центр {R. sphaeroides), 2(,
2,20 А
Р4;2
а = 100,42, b = 100,42, с = 235. a = 90,00,ß = 90,00,y=120

П. р2-а,феііергііческіііі GP(’R-.iiiJomi.i (Я sapiens-phase), 2RH1
2,40 А

a = 106,32, b = 169.24, с = 40,15 а = 90,00, р = 105,62. у = 90
Л. ли*.
Рис. 1.12. Упаковка в кристаллах и молекулярная структура некоторых мембранных белков, закристаллизованных методом іп тезо [13].