Образование активных форм кислорода под влиянием ионов уранила и их токсическое действие

• Автор: Гармаш, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 106 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. УРАН
1.1 УРАН. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1.2 ВАЖНЕЙШИЕ СВОЙСТВА СОЕДИНЕНИЙ УРАНА
1.3 ПРИМЕНЕНИЕ УРАНА И ЕГО СОЕДИНЕНИЙ
1.4 БИОЭКОЛОГИЯ И БИОБЕЗОПАСНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ УРАНА
1.5 ПОСЛЕДСТВИЯ ДЕЙСТВИЯ УРАНА И ЕГО СОЕДИНЕНИЙ НА 17 БИОСИСТЕМЫ
1.5.1 Общий механизм токсического действия урана и его соединений
1.5.2 Механизм проникновения соединений урана в организм человека
1.5.3 Уран и его соединения как причина патологий
ГЛАВА 2. ОБРАЗОВАНИЕ АФК И ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС
2.1 АКТИВНЫЕ ФОРМЫ КИСЛОРОДА
2.1.1 Перекись водорода (Н2О2)
2.1.2 Гидроксильный радикал (*ОН)
2.1.3 Синглетный кислород ('02)
2.1.4 Супероксиданион радикал (Ог")
2.2 МАРКЕРЫ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА
2.2.1 Долгоживущие радикальные формы белка
2.2.2 Микроядерный тест
2.2.3 Карбонильные производные белков
2.2.4 8-оксогуанин в нуклеиновых кислотах
ЗАКЛЮЧЕНИЕ К ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
ЧАСТЬ II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ

3.2. МЕТОДЫ
3.2.1 Подготовка и процедура облучения
3.2.1.1 Подготовка проб и облучение
3.2.1.2 Подготовка животных и облучение
3.2.2 Работа с животными
3.2.2.1 Уход за животными
3.2.2.2 Забой животных
3.2.3 Определение продукции перекиси водорода
3.2.4 Определение продукции гидроксильных радикалов
3.2.5 Определение концентрации растворенного кислорода в среде
3.2.6 Определение продукции долгоживущих радикалов белка
(ДЖРБ)
3.2.7 Определение окислительных модификаций белков по уровню
карбонильных производных
3.2.8 Определение 8-оксогуанина методом иммуноферментного 47 анализа (ИФА)
3.2.9 Определение цитотоксических повреждений в культуре клеток 48 НЕр2
3.2.10 Оценка генотоксического потенциала ионов уранила 49 микроядерным тестом
3.2.11 Работа с митохондриями
3.2.11.1 Выделение митохондрий печени
3.2.11.2 Оценка функциональных параметров митохондрий 5 *

3.2.11.3 Определение Са -емкости в митохондриях печени крысы
3.2.11.4 Образование Н2О2 митохондриями печени *
3.2.12 Тест на выживаемость
3.2.13 Подсчет общего количества клеток периферической крови
3.2.14 Исследование поведения животных
3.2.14.1 Тест «Открытое поле»
3.2.14.2 Тест «Черно-белая камера»

ЧАСТЬ III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ
ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 4. ПРООКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА ИОНОВ УРАНИЛА
4.1 ОБРАЗОВАНИЕ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ПОД 56 ДЕЙСТВИЕМ ИОНОВ УРАНИЛА
4.2 ОБРАЗОВАНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ БЕЛКА И ДНК ПОД 66 ДЕЙСТВИЕМ ИОНОВ УРАНИЛА
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ УРАНИЛНИТРАТА НА
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ 76 МЫШЕЙ И КРЫС
ГЛАВА 6. РАДИОМОДИФИЦИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ИОНОВ УРАНИЛА
ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ ИОНОВ УРАНИЛА НА ОТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ У ЖИВОТНЫХ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

Рис.2. Микроядро в ПХЭ в поле зрения светового микроскопа [Представлено с разрешения автора Гудкова С.В.].
Микроядра могут образоваться:
1) в процессе деления (например, во время митоза) - из хромосомного материала лишенного центромеры, который попадает лишь в одну из дочерних клеток и таким образом формируется микроядро, либо целой хромосомой в результате нерасхождения, связанного с нарушением функции веретена деления.
2) в ходе нарушения интерфазного хроматина.
Одно из первых упоминаний о возможностях и технологии микроядерного теста относится к началу 70-х годов 20 столетия [Schmid et al., 1970]. Однако этот метод подсчета является крайне трудоемким, и поэтому, начиная с 90-х годов прошлого века исследователи из разных стран, специализирующиеся на этом методе, независимо друг от друга предприняли попытку автоматизировать процесс подсчета ПХЭ с МЯ [Hayashi et al., 1992]. Результатом стало создание установки LAMSS (Loast Automated Micronucleus Scoring System), гибкий алгоритм которой позволил существенно облегчить труд исследователя - так анализ 50 препаратов у опытного микроскописта занял бы в среднем около 30 часов, но с помощью LAMSS этот процесс занимает от 5 до 8 часов [Клоков и Заичкина, 2000].