Исследование закономерностей гидролиза триглицеридов свободной и иммобилизованной липазой

• Автор: Беленова, Алёна Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 162 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ '

1.1. Физико-химические свойства липаз

1.2. Основные представления о структуре липаз

1.3. Механизмы ферментативной реакции гидролиза триглицеридов 3

1.4. Применение липолитических ферментов в промышленности

и медицине

1.5. Общие представления об иммобилизованных ферментах

1.6. Иммобилизованные липолитические ферменты и их физико-химические свойства 48 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объект исследования 5
2.2. Методы исследования
2.2.1. Очистка ферментных препаратов от низкомолекулярных примесей
2.2.2. Определение молекулярной массы липазы
2.2.3. Определение размеров молекулы липазы
2.2.4. Определение содержания белка в препарате методом Лоури
2.2.5. Определение содержания белка в иммобилизованных ферментных препаратах модифицированным методом Лоури
2.2.6. Спектрофотометрический метод Андерсона-Маккарти определения каталитической активности липазы
2.2.7. Методика адсорбционной иммобилизации липазы
на нерастворимых носителях
2.2.8. Методика адсорбционной иммобилизации липазы на растворимых носителях
2.2.9. Подготовка исследуемых образцов к анализу методом ИК-спектро ф отометрии
2.2.10. Методика определения различных типов вторичных структур в молекуле липазы
2.2.11. Аналитический электрофорез белков в полиакриламидном геле
2.2.12. Методика атомно-силовой микроскопии
2.2.13. Методика определения процентного содержания аминокислот в первичной структуре белка
2.2.14. Статистическая обработка результатов экспериментов Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ЛИПАЗЫ кнпоршШУЕЦЗ
3.1. Определение молекулярной массы мономеров и димеров липазы
3.2. Исследование особенностей вторичной структуры мономерной и дгайерной форм липазы методом ИК-спектрофотометрии
3.3. Визуализация олигомерной структуры липазы РЫгориз туеия методом атомно-силовой микроскопии
3.4. Определение процентного содержания различных типов аминокислот в первичной структуре липаз, выделенных из разнообразных источников
3.5. Исследование значения ионов Са2+ в функционировании мономерной и димерной форм липазы ЛЫгорш туеиз
3.6. Физико-химические свойства липазы ЯЫгорт туеиз Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ ПРОЦЕССА ТЕРМИЧЕСКОЙ ИНАКТИВАЦИИ МОНОМЕРНОЙ И ДИМЕРНОЙ ФОРМ ЛИПАЗЫ ИЗ Ш1гОРи8МУЕШ
4.1. Изучение кинетических особенностей процесса термической инактивации димерной и мономерной форм липазы РЫгориз туей.у
4.2. Термодинамические аспекты процесса термической инактивации мономерной и димерной форм липазы из РЫгориз ту виз
Глава 5. ВЛИЯНИЕ ОЛЕИНОВОЙ И СТЕАРИНОВОЙ КИСЛОТ

НА ГИДРОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЛИПАЗЫ ИЗ
ыпгориз мгЕиз юо
5.1. Влияние состава растворителя на каталитическую
активность липазы
5.1. Олеиновая и стеариновая кислоты как ингибиторы каталитической активности липазы 102 Глава 6. РАЗРАБОТКА ГОМОГЕННЫХ И ГЕТЕРОГЕННЫХ БИОКАТАЛИЗАТОРОВ НА ОСНОВЕ ЛИПАЗЫ, ИССЛЕДОВАНИЕ
ИХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И КИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
6.1. Иммобилизация липазы на низкомолекулярном и
высокомолекулярном хитозанах
6.2. Иммобилизация липазы на растворимом хитозане
6.3. Исследование механизма взаимодействия молекул липазы с матрицей различных типов хитозанов
6.4. Иммобилизация липазы на растворимом носителе
поли —К-винилпирролидоне
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Таблица
Гены, кодирующие липазы микроорганизмов
Источник фермента Количество генов Источник литературы
Candida albicans 10 [195]
Candida antarctica 2 [93, 223]
Candida rugosa ATCC 14380 5 [71]
Candida deformans CBS 2071 3 [114]
Geotrichum candidum
ATCC 34614 2 [68,170]
NRCC 205002
NRRL Y-552
NRRL Y-533
Trichosporon fermentans WU-C12 2 [72]
Yarrowia lipolytica 3 [70]
Анализ данных литературы показывает, что, несмотря на наличие большого числа работ в области исследования структурно-функциональных особенностей липаз, остается достаточно пробелов в изучении надмолекулярной организации данного класса ферментов.
1.3. Механизмы ферментативной реакции гидролиза триглицеридов
Для проявления каталитической активности гидролаз наибольшее значение имеют карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот, имидазольная группа гистидина, ОН-группа серина, БН-группы цистеина [6].
По данным Ю.А. Тырсина и др. (2009) в элементарном акте катализа при разрыве сложноэфирных связей активное участие принимает имидазольная группа гистидина [13]. Н. Клуоп Щ а1. (2000) осуществили