Молекулярно-клеточные маркеры лимфоцитов больных меланомой как прогностический показатель клинического ответа на химиотерапию

• Автор: Артамонов, Дмитрий Николаевич
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : ил.

1. Введение.

2. Обзор литературы по теме.

2.1.Механизмы цитотоксичности препаратов, применяемых в химиотерапии меланомы.

2.2. Гены системы коррекционной репарации как маркеры меланомы.

2.3. Изменение генов, контролирующих Fas-сигналинг при меланоме.

3. Собственные исследования.

3.1. Материалы и методы.

3.1.1. Характеристика больных и процедура химиотерапии.

3.1.2. Выделение лимфоцитов.

3.1.3. Определение повреждения ДНК методом комет.

3.1.4. Оценка эффективности механизмов репарации BER и MMR.

3.1.5. Иммуноцитохимическое определение экспрессии белков.
3.1.6. Определение пролиферативного индекса и доли погибших клеток.
3.1.7. Статистический анализ.
3.2. Результаты.
3.2.1. Повреждение ss/IHK и ее репарация с участием механизма

3.2.2. Двунитевые разрывы после химиотерапии связаны с активацией механизма MMR.
3.2.3. Повреждение ssJIHK и механизм BER не коррелируют с клиническим ответом HaLDCI-терапию.
3.2.4. Вторичная деградация ds-ДНК коррелирует с клиническим ответом на LDCI-терапию.
3.2.6.Сравнение ответов лимфоцитов на химиотерапию и тест-воздействие МРІМ в течение 7 циклов.
3.3 Обсуждение.
4. Выводы.
5. Список цитированной литературы.

1. Введение.
Общая характеристика работы.
Актуальность проблемы.
Меланома, высоко агрессивное неопластическое заболевание,
поддается лечению на начальных стадиях. По мере прогрессии заболевания эффективность лечения снижается. На ранних стадиях развития меланома поддается хирургическому лечению.
На стадии метастазирования меланома характеризуется высокой
лекарственной устойчивостью и высокой летальностью. Ведущее место среди терапевтических процедур, применяемых при меланоме, занимает цитотоксическая химиотерапия. Монофункциональные алкилирующие
агенты дакарбазин, прокарбазин а также нитрозомочевины, кармустин и ломустин, входят в состав стандартного протокола лечения меланомы (Gogas et al., 2007). Однако частота положительного ответа больных в случае терапии только дакарбазином или комбинацией дакарбазина с кармустином и ломустином не превышает 20% (Anderson et al., 1995; Chapman et al., 1999; Wagner et al., 2000, Mays et al., 1999). Две исследовательские стратегии направлены на преодоление низкой эффективности химиотерапии:
разработка новых терапевтических подходов и поиск маркеров,
позволяющих прогнозировать индивидуальную устойчивость/ чувствительность больных к химиотерапии.
Большинство меланом адекватно диагностируется с использованием гистологических критериев. Наиболее часто используемыми показателями для прогноза меланомы кожи являются максимальный вертикальный размер опухоли, глубина инвазии и наличие или отсутствие изъязвлений (Balch et al., 2001).
Однако до сих пор отсутствуют неинвазивные маркеры, позволяющие с приемлемой вероятностью прогнозировать индивидуальный терапевтический ответ, хотя потребность в них высока. Пилотное исследование на лимфоцитах с целью сопоставления с клиническим ответом-на химиотерапию было ранее проведено на 25 больных различными онкологическими заболеваниями (из них 11 - опухоль Ходжкина) в ходе химиотерапии, использующей различные- схемы, в зависимости от заболевания (Nadin et all, 2006). В работе (Sobol et ab, 2006) исследовали корреляцию между репаративными механизмами MMR и BER в клетках опухолевой ткани, извлеченной из больных меланомой и клиническим ответом на монохимиотерапию пациентов (дакарбазин и темозол омид).-Активность репарации оценивали иммуноцитохимически по уровню экспрессии белков системы MMR (MLH1 и MSH2) и ДНК-полимеразы, участвующей в механизме BER. Однако авторам не удалось обнаружить корреляции ни в одном случае заболевания ни одного-из исследованных ими биомаркеров. Высокая экспрессия генов ДНК репарации в клетках меланомы
электрофореза слайды ополаскивали раствором 0.4 М Тпз-НС1 и проводили те же операции, что и для нейтральных комет. В процессе микроскопии накапливали изображения комет в памяти компьютера и обсчитывали их по программе САБР (Копса е1 а1., 2003).
Рис. 9. Микрофотография кометы при использовании нейтрального метода для определения двунитевых разрывов ДНК.