Сигнальные белки хемосенсорных клеток млекопитающих

• Автор: Быстрова, Марина Федоровна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 230 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Вкусовая система

1.1.1 Структурная и клеточная организация периферического

вкусового органа

1.1.2 Межклеточные коммуникации во вкусовой ночке

1.1.3 Пуринергическая сигнальная система

1.1.4 Рецептор экстраклеточного кальция

1.1.5 Ионные каналы

1.2. Хемосенсорные клетки главного обонятельного эпителия

1.3. Редокс-сигнализация
1.3.1.Тиоловые группы белков являются сенсорами Н202 в клетке
1.3.2. Н2О2 модулирует активность тирозиновых протеинкиназ и
фосфатаз
1.3.3. Перекись водорода как вторичный посредник
1.3.4. Н202 и принцип специфичности в сигнальной трансдукции
1.3.5. Пероксиредоксины в редокс-регуляции внутриклеточной
сигнализации
1.4. Стохастический характер экспрессии генов
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1П.1. Исследование сигнальных белков вкусовых клеток на уровне ткани.
III. 1.1. Пуринергическая сигнальная система
III. 1.2. Фосфолипазы вкусовых клеток
III. 1.3. Анализ экспрессии во вкусовой ткани генов, кодирующих щ-субъединицу Са2-каналов L-типа
III. 1.4. Исследование АТФ-проницаемые ионных каналов
III. 1.5. Идентификация во вкусовой ткани гептаспиральных рецепторов аминокислот
Ш.2. Исследование локализации обонятельного маркерного белка в тканях с эктопической экспрессией генов обонятельных рецепторов
III.3. Исследование белок-белковых взаимодействий
111.3.1. Исследование белок-белковых взаимодействий в обонятельном эпителии крысы с помощью биохимических методов
111.3.2. Поиск белковых партнеров пероксиредоксина 6 с помощью скрининга двухгибридной клонотеки Hybrid Hunter
111.3.3. Анализ обнаруженных белок-белковых взаимодействий
III.4. Исследование одиночных хемосенсорных клеток
111.4.1. Анализ экспрессии генов в одиночных вкусовых клетках
111.4.1.1. Применение стратегии линейной амплификации РНК для анализа-экспрессии генов в одиночных вкусовых клетках типа II
III.4.1.2 Применение стратегии экспоненциальной амплификации кДНК для анализа экспрессии генов в одиночных вкусовых клетках трех типов
111.4.2. Анализ экспрессии генов в одиночных обонятельных нейронах
III.4.2.1. Оптимизация метода амплификации РНК для анализа на уровне одиночных клеток экспрессии генов, имеющих процессированные псевдогены-ортологи
111.4.3. Анализ обнаруженной клеточной гетерогенности
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Список литературы

активности различных сигнальных молекул, в том числе фосфатаз, киназ, протеаз, ионных каналов и транспортеров, факторов транскрипции и контроля клеточного цикла (Rhee et al, 2000, 2006; Fedoroff, 2006).
1.3.1.ТиОЛОВЫе группы белков ЯВЛЯЮТСЯ сенсорами Н2С>2 в клетке.
В последние годы в научной литературе появилось понятие окислительновосстановительной, или редокс-регуляции процесса внутриклеточной сигнализации, которая базируется на пост-трансляционной окислительновосстановительной модификации белков и где перекиси водорода отводится роль вторичного посредника в трансдукции разнообразных сигналов (Rhee et al, 2005). Мишенями перекиси водорода являются вполне определенные молекулярные структуры, а именно сульфгидрильные, или тиоловые, SH-группы белковой молекулы, принадлежащие боковым цепям остатков цистеина (Торчинский, 1971; Claiborne et al, 1999). Тиоловые группы белков подвергаются в мягких условиях окислению с образованием сульфеновой кислоты (SOH), а также между- или внутримолекулярных дисульфидных связей. Окислительно-восстановительные превращения SH-групп существенных цистеинов сигнальных белков до сульфенатов (S02H) и дисульфидов и более того - даже до сульфинатов (SO3H), как- это происходит, например, у перокеиредоксинов,. являются обратимыми. Нужно отметить, что обратимость реакций является необходимым условием того, чтобы они были сигнальными. Более жесткое окисление тиоловой группы до сульфоната приводит к необратимой модификации белка. Скорость и характер окисления SH-групп зависят от концентрации реагентов, pH, температуры, рКа, важным фактором также является пространственное расположение SH-групп в белке (т.е. их доступность) и их микроокружение. К настоящему времени считается доказанным, что SH-группы играют роль сенсора концентрации перекиси водорода в клетке. Наиболее убедительным свидетельством в пользу существования редокс-сенсоров является открытие редокс-чувствительного фактора транскрипции