Анализ действия УФ-излучения и некоторых индукторов интерферона на состояние Т-лимфоцитов крови человека

• Автор: Дубова, Светлана Михайловна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 167 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ

ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика Т-лимфоцитов и их субпопулядий

1.1.1. Формирование Т-клеток

1.1.2. Функциональные особенности субпопуляций Т-лимфоцитов

1.1.3. Особенности строения лимфоцитов и их мембран

1.2. Молекулы клеточной адгезии

1.2.1. Структура и функции CD2 рецептора

1.2.2. Структура и функции CD 11 a/CD 18 рецептора
1.2.3. Структура и функции CD49/CD29 рецепторов
1.3. Структурно-функциональная УФ-модификация клеток крови
1.4. Особенности влияния препарата «Циклоферон» на структурнофункциональное состояние иммуноцитов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров
2.2.2. Определение жизнеспособности клеток
2.2.3. Получение популяции Т-лимфоцитов
2.2.4. Облучение Т-лимфоцитов УФ-светом
2.2.5. Модификация Т-лимфоцитов препаратом «Циклоферон», фитогемагглютинином и блокаторами синтеза белка
2.2.6. Использование метода иммуноферментного анализа для определения экспрессии CD2, CD 11а и CD29 антигенов Т-лимфоцитами человека
2.2.7. Определение концентрации а-ИФН в супернатанте Т-лимфоцитов при помощи метода твердофазного иммуноферментного анализа
2.2.8. Определение концентрации у-ИФН в супернатанте Т-лимфоцитов при помощи метода твердофазного иммуноферментного анализа
2.2.9. Определение концентрации (3-ИФН в супернатанте Т-лимфоцитов при помощи метода твердофазного иммуноферментного анализа
2.2.10. Исследование структурного состояния лимфоцитарных мембран при помощи флуоресцентного зонда 1,8-АНС
2.2.11. Использование метода проточной цитофлуориметрии для оценки экспрессии адгезивных молекул мембран Т-лимфоцитов
2.2.12. Определение изменения локализации С02 и С1)11 а/С1)18 рецепторов на мембранах Т-лимфоцитов с помощью метода люминесцентной микроскопии
2.2.13. Статистическая обработка результатов
Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ МОДУЛЯЦИИ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ МЕМБРАН Т-ЛИМФОЦИТАМИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИКОХИМИЧЕСКИХ АГЕНТОВ
3.1. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии С02, СЭ11а и СВ29 маркеров Т-лимфоцитами
3.2. Изучение влияния медицинского препарата «Циклоферон» на уровень экспрессии адгезивных С02, СИ 11а и СБ29 маркеров нативными и УФ-облученными Т-лимфоцитами
3.3. Изучение влияния блокаторов синтеза белка на уровень экспрессии СЭ2, СО 11а и СБ29 антигенов Т-лимфоцитами в условиях воздействия УФ-излучения и циклоферона
3.3.1. Изучение влияния циклогексимида на уровень экспрессии СВ2. СЮ11а и С029 маркеров Т-лимфоцитами в условиях воздействия УФ-излучения
3.3.2. Изучение влияния циклогексимида на уровень экспрессии CD2, CDlla и CD29 маркеров Т-лимфоцитами в условиях сочетанного воздействия УФ-излучения и циклоферона
3.3.3. Изучение влияния анизомицина на уровень экспрессии CD2, CD11а и CD29 маркеров нативными и УФ-облученными Т-лимфоцитами
3.3.4. Изучение влияния анизомицина на уровень экспрессии CD2, CD11а и CD29 маркеров Т-лимфоцитами в условиях сочетанного воздействия УФ-излучения и циклоферона
3.4. Использование метода проточной цитофлуориметрии для оценки влияния УФ-излучения на экспрессию CD2, CDlla и CD29 маркеров Т-
лимфоцитами
Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНОГО СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН Т-ЛИМФОЦИТОВ МЕТОДОМ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ЗОНДОВ В УСЛОВИЯХ КОМПЛЕКСНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИКОХИМИЧЕСКИХ АГЕНТОВ
4.1. Исследование влияния УФ-излучения на структурное состояние мембран Т-лимфоцитов методом флуоресцентных зондов
4.2. Исследование влияния циклогексимида на структурное состояние лимфоцитарных мембран в условиях воздействия УФ-света методом флуоресцентных зондов
4.3. Исследование влияния анизомицина на структурное состояние лимфоцитарных мембран в условиях воздействия УФ-света методом флуоресцентных зондов
Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ПРОЦЕССОВ КЭППИНГА АДГЕЗИВНЫХ CD2 И CDlla/CD18 РЕЦЕПТОРОВ Т-ЛИМФОЦИТОВ В
УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ УФ-СВЕТА И ЦИКЛОФЕРОНА
5.1. Исследование влияния УФ-излучения на локализацию CD2 и CD 11 a/CD 18 рецепторов на поверхности мембран Т-лимфоцитов

Важнейшая особенность УФ-излучения состоит в том, что лучи разной длины волны поглощаются различными по химическому составу и конформации биомолекулами (В.Г. Артюхов и др., 2009).
В биосистемах УФ-свет индуцирует главным образом фотодеструктивные реакции, связанные с фотохимическими превращениями белков и нуклеиновых кислот, относящихся к основным акцепторам УФ-излучения в клетке. Кроме того, в биомембранах УФ-свет инициирует протекание процессов пероксидного фотоокисления ненасыщенных жирных кислот липидов (олеиновой, линолевой, линоленовой и арахидоновой). В большей степени оно обусловлено поглощением УФ-света гидропероксидами липидов, присутствующих в норме в липидных системах вследствие протекания ферментативных процессов ПОЛ. Продукты фотоокисления липидов и соединения, образующиеся в результате их дальнейшего превращения, могут индуцировать повреждение белковых молекул, приводя к серьезным нарушениям структуры биомембран. Повреждение белков может быть обусловлено как их окислением, так и образованием стабильных ковалентных связей между молекулами белков и продуктами пероксидного фотоокисления липидов.
Наибольшую роль в УФ-инактивации белков играют остатки серосодержащих (цистин и цистеин) и ароматических аминокислот (триптофан, фенилаланин и тирозин). Основной первичной фотореакцией ароматических аминокислот в белке является фотоионизация - отрыв электрона от молекулы аминокислоты (АН) с образованием катион-радикала (АН4") и сольватированного электрона . Наибольшим сродством к последнему обладают цистин и цистеин в результате чего они разрушаются (А.Б. Рубин, 2004; Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко, 2006; В.Г. Артюхов и др., 2009).